| Project/Area Number |
18K05551
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 38060:Applied molecular and cellular biology-related
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| Research Institution | Ochanomizu University |
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Principal Investigator |
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2020)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2020: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2019: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2018: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
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| Keywords | VLP / ワクチン / 昆虫細胞 / ウイルス様粒子 / 糖タンパク質 / ゲノム編集 / CRISPR-Cas9 |
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| Outline of Final Research Achievements |
We produced VLP with JEV as a model VLP by overexpressing prM and E proteins. The VLP was produced by transiently transfecting suspension cultured Sf9 cells with PEI. The VLP was purified by sucrose density gradient centrifugation and size exclusion chromatography. After the purification steps, two main bands were observed. The bands were excised and applied to Edman degradation to analyze N-terminal amino acid sequences. NCBI database has no proteins which are similar to the N-terminal amino acid sequences.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
VLPを振とう培養中のSf9細胞に一過性発現させることで産生させることができた。これまで安定的発現を用いて発現されていたVLPを、一過性発現で大量発現できるようになったことは、迅速なワクチン開発という点から非常に意義がある。
残念ながら同定できなかった2本のタンパク質のバンドも、他の方法で同定することができれば、VLP精製過程で取り除くことが難しい細胞由来タンパク質として除去することが可能となる。これにより、精製過程を簡便化し、より精製度の高いVLPを産生することができるようになる。
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