癌の転移先臓器決定と覚醒におけるCrkおよびExosomeの機能解析
| Project/Area Number |
18K07059
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49030:Experimental pathology-related
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
津田 真寿美 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (30431307)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 伸哉 北海道大学, 医学研究院, 教授 (70261287)
王 磊 北海道大学, 医学研究院, 助教 (70637975)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2018: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | エクソソーム / 転移 / CRK / Crk / 癌 / ヘテロジェナイティー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
がんの転移において、転移先臓器で長年潜伏していたがん細胞が何をきっかけに覚醒・再増殖するのか、また解剖学的位置関係からは説明しにくい臓器に転移・再発する理由はなぜか、その詳細な分子メカニズムは未だ解明されていない。我々はこれまで、シグナル伝達アダプター分子Crkががんの増殖・接着・ 浸潤・転移の全てのステップにおいて重要な役割を果たしていることを見出した。本研究では、Crkによるエクソソームの多様性形成メカニズムを明らかにし、がん転移の臓器選択性とがん細胞の覚醒との関連性を解明する。
当該年度は、マウスxenograftにおいて、エクソソームとがんの転移先臓器の親和性を解析するために、ヒト膀胱癌細胞から分離したエクソソームをPKH67で蛍光ラベルし、ヌードマウスの尾静脈から接種。一日後にマウスのどの臓器に取込まれているかを蛍光顕微鏡下で観察した所、野生型の膀胱癌細胞から分離したエクソソームは肺で検出されたが、Crkノックダウン細胞から分離されたエクソソームは検出されなかった。さらに、エクソソームを連続投与して転移先臓器をeducate（教育）した後（1日置きに2週間、計6回投与）、tdTomato-Luc2導入野生型膀胱癌細胞を尾静脈から接種し、一ヶ月後にIVIS spectrumで転移巣形成の有無を観察した所、野生型膀胱癌細胞由来のエクソソームでeducateしたマウスでは肺転移巣が形成されたが、Crkノックダウン細胞由来のエクソソームでeducateしたマウスでは形成されなかった。この結果は、Crkがエクソソームを介してがんの転移の成立と促進に寄与することを示す画期的なデータである。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究は、当初の予定通りに遂行されている。現在まで、特別な問題点や実験の遅れは生じていない。次年度以降も研究計画に沿って研究を遂行する。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、Crk依存的エクソソームヘテロジェナイティー形成とがん細胞の覚醒との関連性を解析するために、種々の癌腫由来のがん細胞に細胞周期の進行をモニタリングするFucciベクターを導入後、高濃度BrdU処理によりがん細胞に細胞老化を誘導。その後、エクソソームを処理し、どのエクソソームがどの癌腫の休眠状態のがん細胞を覚醒(再増殖)できるかをタイムラプス蛍光顕微鏡下で解析する。覚醒前後のがん細胞は、 EMT、がん幹細胞、ヒストンメチル化関連分子に対する免疫染色を施行し、がん細胞の動態を解析す る。これらを、野生型およびCrkノックダウン細胞由来のエクソソーム間で比較し、Crkが制御するがん転移先臓器選択性とがん細胞覚醒化の全体像をパネル化する。
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Report
(2 results)
Research Products
(52 results)
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[Journal Article] Role of dimerized C16orf74 in aggressive pancreatic cancer: A novel therapeutic target.2020
Author(s)
Kushibiki T, Nakamura T, Tsuda M, Tsuchikawa T, Hontani K, Inoko K, Takahashi M, Asano T, Okamura K, Murakami S, Kurashima Y, Ebihara Y, Noji T, Nakanishi Y, Tanaka K, Maishi N, Sasaki K, Park W-R, Shichinohe T, Hida K, Tanaka S, Hirano S.
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Journal Title
Molecular Cancer Therapeutics
Volume: 19
Pages: 187-198
DOI
Related Report
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[Journal Article] Autopsy findings in the early stage of ALS with `dropped head` syndrome.2019
Author(s)
Tanikawa S, Tanino M, Wang L, Ishikawa M, Miyazaki M, Tsuda M, Orba Y, Sawa H, Matoba K, Nakamura N, Nagashima K, Hall W, Tanaka S.
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Journal Title
Neuropathology
Volume: 39
Pages: 374-377
DOI
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[Journal Article] Clinical efficacy and safety of first-line nilotinib therapy and evaluation of the clinical utility of the FRET-based drug sensitivity test.2019
Author(s)
Kondo T, Fujioka M, Fujisawa S, Sato K, Tsuda M, Miyagishima T, Mori A, Iwasaki H, Kakinoki Y, Yamamoto S, Haseyama Y, Ando S, Shindo M, Ota S, Nishio M, Kurosawa M, Ohba Y, Teshima T, on behalf of the North Japan Hematology Study Group (NJHSG).
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Journal Title
International Journal of Hematology
Volume: 110
Pages: 482-489
DOI
Related Report
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[Journal Article] A Clinicopathological Analysis of Six Autopsy Cases of Sudden Unexpected Death due to Infectious Aortitis in Patients with Aortic Tears2018
Author(s)
Kato MI, Tanino MA, Miyazaki M, Kimura T, Ishida Y, Wang L, Tsuda M, Nishihara H, Nagashima K, Tanaka S
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Journal Title
Intern. Med.
Volume: Epub ahead of print
Issue: 10
Pages: 1375-1380
DOI
NAID
ISSN
0918-2918, 1349-7235
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[Journal Article] Pre-treatment evaluation of FRET-based drug sensitivity test for patients with CML treated with dasatinib.2018
Author(s)
Kondo T, Fujioka M, Tsuda M, Murai K, Yamaguchi K, Miyagishima T, Shindo M, Nagashima T, Wakasa K, Fujimoto N, Yamamoto S, Yonezumi M, Saito S, Sato S, Ogawa K, Chou T, Watanabe R, Kato Y, Takahashi S, Okano Y, Yamamoto J, Ohta M, Iijima H, Oba K, Kishino S, Sakamoto J, Ishida Y, Ohba Y, Teshima T.
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Journal Title
Cancer Sci.
Volume: 109
Pages: 2256-2265
DOI
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[Journal Article] Tough and self-recoverable thin hydrogel membranes for biological applications.2018
Author(s)
Ye YN, Frauenlob M, Wang L, Tsuda M, Sun TL, Cui K, Takahashi R, Zhang HJ, Nakajima T, Nonoyama T, Kurokawa T, Tanaka S, Gong JP.
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Journal Title
Advanced Functional Materials
Volume: 28
Pages: 1801489-1801489
DOI
NAID
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Author(s)
Konishi Y, Kawamata F, Nishihara H, Homma S, Kato Y, Tsuda M, Kohsaka S, Einama T, Liu C, Yoshida T, Nagatsu A, Tanino M, Tanaka S, Kawamura H, Kamiyama T, Taketomi A.
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Journal Title
Med Oncol
Volume: 35
Pages: 104-104
DOI
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[Journal Article] “Integrated diagnosis” of pilocytic astrocytoma: Molecular diagnostic procedure for an unusual case.2018
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Ishida Y, Tsuda M, Sawamura Y, Fujii K, Murai H, Horiuchi N, Orba Y, Sawa H, Hall WW, Nagashima K, Tanaka S.
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Journal Title
Pathology Int.
Volume: 68
Pages: 694-699
DOI
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