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時間軸に沿った核での物質動態可視化システムの開発

Research Project

Project/Area Number 19038004
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionUniversity of Tsukuba

Principal Investigator

三輪 佳宏  University of Tsukuba, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (70263845)

Project Period (FY) 2007 – 2008
Project Status Completed (Fiscal Year 2008)
Budget Amount *help
¥7,500,000 (Direct Cost: ¥7,500,000)
Fiscal Year 2008: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2007: ¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,900,000)
Keywords蛍光タンパク / FRET / 免疫 / 蛍光タンパク質 / タンパク質分解 / イメージング / 遺伝子発現
Research Abstract

1) デグラトンプローブによる可視化SUMO標的タンパク質の同定
19年度にひきつづき得られた候補タンパク質の検証を進めた。確認できたタンパク質については、核での局在とSUMO化の状態を、再びイメージングに戻って解析した。更にターンオーバーの状態についても解析を進めた。蛍光タンパク質Kaedeは、光照射によって波長が変化する際にβ脱離反応によりポリペプチド鎖が切断されるため、分子量の違いから光照射の時点で既に存在していたタンパク質とそれ以後に産生されたものを区別でき、パルスチェイス実験が可能である。これを応用することでターンオーバー速度が解析できる。以上の結果から、時間軸に沿ったイメージングの精度について総合的に検証する。新規SUMO化タンパク質が得られる可能性も高いので、その生理的な意義についての解析も実施した。
さらに、SUMOの活性化状態そのものを直接的に検出できる実験系の構築を目指して、蛍光寿命測定技術を応用することを試みた。これまでタンパク質同士の結合をFRETで検出する場合には、2色の蛍光強度比によって解析していたため、分子間FRETの検出が困難であった。この問題を蛍光寿命測定装置の導入によって解決することを試みた結果、SUMOの活性化状態をFRETによって、極めて高速に検出することが可能となった。また昨年度より開発を進めていたKaedeのin vivo応用も並行して進め、細胞の動きをトレースできるモデル動物の創出に成功し、免疫系の解析に実際に応用した。

Report

(2 results)
  • 2008 Annual Research Report
  • 2007 Annual Research Report
  • Research Products

    (10 results)

All 2009 2008 2007

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (3 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (2 results)

  • [Journal Article] Monitoring cellular movement in vivo with photoconvertible fluorescence protein "Kaede" transgenic mice2008

    • Author(s)
      Tomura, M
    • Journal Title

      Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105

      Pages: 10870-10875

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The C. elegans CBFβ homologue BRO-1 interacts with the Runx factor, RNT-1, to promote stem cell proljferation and self-renewal2007

    • Author(s)
      Kagoshima H
    • Journal Title

      Development 134

      Pages: 3905-3915

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel embryonic stem cells expressing tdKaede protein photoconvertible from green to red fluorescence.2007

    • Author(s)
      Shigematsu Y
    • Journal Title

      Int.J.Mol.Med 20

      Pages: 439-444

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Involvement of an autocrine stromal cell derived factor-1/CXCR4 system on the distant metastasis of human oral squamous cell carcinoma2007

    • Author(s)
      Uchida D
    • Journal Title

      Mol.Cancer Res 5

      Pages: 685-694

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 7-ヒドロキシキノリン誘導体を用いたバイオイメージング蛍光色素の開発2008

    • Author(s)
      千田直子
    • Organizer
      第31回日本分子生物学会・第81回日本生化学会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2008-12-11
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Presentation] 蛍光寿命測定FCM(Flicyme)を用いた簡単FRETシステムの開発とよびその応用2008

    • Author(s)
      田中順子
    • Organizer
      第31回日本分子生物学会・第81回日本生化学会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2008-12-11
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Presentation] フローサイトメーターを用いた細胞内局在の定量的解析法2007

    • Author(s)
      田中順子
    • Organizer
      第17回サイトメトリー学会年会
    • Place of Presentation
      横浜サンルートプラザ東京
    • Year and Date
      2007-07-06
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Book] 蛍光・発光試薬の選び方と使い方2007

    • Author(s)
      三輪佳宏(編集)
    • Total Pages
      186
    • Publisher
      羊土社
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 細胞透過型新規蛍光色素2009

    • Inventor(s)
      三輪佳宏、千田直子、新井達郎
    • Industrial Property Rights Holder
      筑波大学
    • Industrial Property Number
      2009-058645
    • Filing Date
      2009-03-11
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 顕微鏡察用容器2008

    • Inventor(s)
      三輪, 佳宏
    • Industrial Property Rights Holder
      日本ゼオン筑波大学
    • Filing Date
      2008-03-27
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2007-04-01   Modified: 2018-03-28  

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