In vitro selection of novel recombinant antibodies

• Project/Area Number: 19360377
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Biofunction/Bioprocess
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: DOI Nobuhide Keio University, 理工学部, 准教授 (50327673)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柳川 弘志 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (40327672)
• Co-Investigator(Renkei-kenkyūsha): YANAGAWA Hiroshi 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (40327672)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥18,070,000 (Direct Cost: ¥13,900,000、Indirect Cost: ¥4,170,000); Fiscal Year 2008: ¥8,580,000 (Direct Cost: ¥6,600,000、Indirect Cost: ¥1,980,000); Fiscal Year 2007: ¥9,490,000 (Direct Cost: ¥7,300,000、Indirect Cost: ¥2,190,000)
• Keywords: 生物機能工学 / 組み換え抗体 / ライブラリー / 試験管内進化 / 抗体医薬 / 一本鎖抗体 / Fab抗体 / 試験管内選択 / DNAディスプレイ法 / RNAディスプレイ法 / ライプラリー / 進化

Research Abstract

mRNAディスプレイ(IVV)法を用いて、合成一本鎖抗体(scFv)ライブラリーから濃縮効率100万倍以上の高効率で、様々な抗原に結合するscFvや、on-rate選択およびoff-rate選択により親和性の向上したscFvを迅速かつ簡便に取得する手法を確立した。また、同様の手法を単一のドメイン抗体(ナノ抗体)の試験管内進化にも適用できた。次に、DNAディスプレイ(STABLE)法を用いて、二本鎖のFab抗体の試験管内選択に世界で初めて成功した。さらに、STABLE法のスクリーニング効率を上げるために、ビーズエマルジョンPCRとSTABLE法とを組み合わせた新しい手法を開発した。

Research Products

• [Journal Article] Rapid antibody selection by mRNA display on a microfluidic chip (2009)
  • Author(s): Tabata, N., Sakuma, Y., Honda, Y., Doi, N., Takashima, H., Miyamoto-Sato, E., Yanagawa, H.
  • Journal Title: Nucleic Acids Res. 37 Pages: 64-64
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Rapid antibody selection by mRNA display on a microfluidic chip (2009)
  • Author(s): Tabata, N.
  • Journal Title: Nucleic Acids Res. 掲載決定
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Use of cDNA tiling arrays for identifying proteininteractions selected by in vitro display technologies (2008)
  • Author(s): Horisawa, K., Doi, N., Yanagawa, H.
  • Journal Title: PLoS ONE 3 Pages: 1646-1646
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Use of cDNA tiling arrays for identifying protein-interactions selected by in vitro display technologies (2008)
  • Author(s): Horisawa, K
  • Journal Title: PLoS ONE 3
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Photocleavable linkage between genotype and phenotype for rapid and efficient recovery of nucleic acids encoding affinity-selected proteins (2007)
  • Author(s): Doi, N., Takashima, H., Wada, A., Oishi, Y., Nagano, T., Yanagawa, H.
  • Journal Title: J. Biotechnol. 131 Pages: 231-239
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] High-throughput fluorescence labeling of full-length cDNA products based on a reconstituted translation system (2007)
  • Author(s): Kawahashi, Y., Doi, N., Oishi, Y., Tsuda, C., Takashima, H., Baba, T., Mori, H., Ito, T., Yanagawa, H.
  • Journal Title: J. Biochem. 141 Pages: 19-24
  • NAID: 10020101733
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Use of cDNA tiling arrays for identifying protein-interactions selected by in vitro display technologies (2007)
  • Author(s): Horisaw, K.
  • Journal Title: PLoS ONE 3
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Photocleavable linkage between genotype and phenotype for rapid and efficient recovery of nucleic acids encoding affinity-selected proteins (2007)
  • Author(s): Doi, N.
  • Journal Title: J.Biotechnol. 131 Pages: 231-239
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] High-throughput fluorescence labeling of full-length cDNA products based on a reconstituted translation system (2007)
  • Author(s): Kawahashi, Y.
  • Journal Title: J.Biochem 141 Pages: 19-24
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ビーズエマルジョンPCRとSTABLE法の組み合わせによる受容体ペプチドリガンド探索手法の開発 (2008)
  • Author(s): 丸岡優子, 住田壮, 山川奈津子, 土居信英, 柳川弘志
  • Organizer: 第81回日本生化学会・第31回日本分子生物学会合同年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] IVV法による選択実験の多用途性 (2008)
  • Author(s): 田畠典子, 佐久間裕子, 山川奈津子, 土居信英, 柳川弘志
  • Organizer: 第81回日本生化学会・第31回日本分子生物学会合同年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] 抗体医薬開発に向けたヒト一本鎖抗体のIVVスクリーニング (2008)
  • Author(s): 木村香緒梨, 小磯崇, 田畠典子, 土居信英, 柳川弘志
  • Organizer: 第81回日本生化学会・第31回日本分子生物学会合同年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] DNAディスプレイ法によるFab抗体の完全試験管内選択 (2008)
  • Author(s): 住田壮, 土居信英, 柳川弘志
  • Organizer: 第81回日本生化学会・第31回日本分子生物学会合同年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] In vitro virus法を用いたヒト一本鎖抗体の試験管内選択 (2007)
  • Author(s): 小磯崇, 福田伊佐央, 鬼丸美智子, 田畠典子, 土居信英, 高嶋秀昭, 柳川弘志
  • Organizer: 第80回日本生化学会・第30回日本分子生物学会合同年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2007-12-11