Cryotrapped reaction intermediates in cytochrome P450 and kineticsanalyses by newly developed rapid-freeze-quench EPR spectroscopy

• Project/Area Number: 19550165
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Chemistry related to living body
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: HORI Hiroshi Osaka University, 大学院・基礎工学研究科, 准教授 (20127294)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000); Fiscal Year 2008: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2007: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
• Keywords: 生物無機化学 / シトクロムP450cam / 一原子酸素添加反応 / 反応中間体 / 急速混合凍結装置 / 電子スピン共鳴 / EPR / プチダレドキシン / シトクロームP450cam / 過酸 / ポルフィリンπカチオンラジカル

Research Abstract

サブミリ秒領域で酵素反応の進行を停止させ、捕捉した反応中間体を電子スピン共鳴法で検出・同定するため、再現性の良い急速混合凍結システムを開発した(不感時間 0.2 ms)。酸化型シトクロムP450camと過酢酸の反応でポルフィリンπカチオンラジカル中間体分子種の捕捉・同定に成功した。還元型P450cam・電子供与体複合体と酸素分子との急速混合凍結実験で還元型ヘム鉄に結合している酸素分子が1電子還元されたペルオキシド型反応中間体分子種の捕捉に初めて成功した

Research Products

• [Journal Article] 金属タンパク質の電子常磁性共鳴(EPR)測定をしようとする人のために (2008)
  • Author(s): 堀洋
  • Journal Title: 蛋白質科学会アーカイブ(Web公開誌) 1#037 Pages: 1-71
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 金属タンパク質の電子常磁性共鳴(EPR)測定をしようとする人のために (2008)
  • Author(s): 堀 洋
  • Journal Title: 蛋白質科学会アーカイブ (Web公開誌) 1, #037 Pages: 1-71
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 急速混合凍結EPR法によるP450cam反応サイクルにおける新しい反応中間体の観測 (2007)
  • Author(s): 堀洋
  • Organizer: 日本生物物理学会第45回年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2007-12-21
• [Presentation] 急速混合凍結EPR法によるP450cam反応サイクルにおける新しい反応中間体の観測 (2007)
  • Author(s): 堀 洋
  • Organizer: 日本生物物理学会 第45回年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2007-12-21