Enzymatic analysis of the chromosome replication regulation by MCM helicase complex

• Project/Area Number: 19570145
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Functional biochemistry
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• Principal Investigator: ZHIYING You Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research, 東京都臨床医学総合研究所, 主任研究員 (90332270)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000); Fiscal Year 2008: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2007: ¥2,730,000 (Direct Cost: ¥2,100,000、Indirect Cost: ¥630,000)
• Keywords: 酵素の作用機作と調節 / DNA複製 / MCMヘリカーゼ / Cdt1 / 複製フォーク / ATP結合活性 / ヘリカーゼとDNA結合活性 / Cdt1タンパク質 / MCM結合蛋白 / DnaB・DnaC複合体

Research Abstract

MCM複合体は複製フォークにおけるDNAヘリカーゼとして機能する。昨年度に、MCMのヘリカーゼ活性はCdt1と結合して複合体を形成しより強いヘリカーゼ活性を示すこと、さらにCdt1はATPに結合する可能性を見出した。本年度は、Cdt1配列上にATP結合タンパクとの相同配列を見出し、その保存配列の変異体を作製した。この変異体はin vitroでATP結合能をほぼ完全に消失していた。さらにこれと同じ変異がdrosophilaの発生異常の原因として同定されていることが明らかとなった。以上の事実はCdt1のATP結合は、その機能制御に重要な役割を果たすことを示す。

Research Products

• [Journal Article] Cdt1 forms a complex with the minichromosome maintenance protein (MCM) and activates its helicase activity (2008)
  • Author(s): Zhiying You, Hisao Masai
  • Journal Title: J Biol. Chem. 283 Pages: 24469-24477
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] MCMタンパク質のDNA複製における役割 (2007)
  • Author(s): Zhiying You, 正井 久雄
  • Journal Title: 実験医学増刊号「染色体サイクル」 25 Pages: 609-613
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] UVクロスリンキング法 (2007)
  • Author(s): Zhiying You, 正井 久雄
  • Journal Title: 実験医学別册「分子間相互作用解析バンドブック」 19 Pages: 164-167
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Cdt1 forms a complex with MCM and activates its helicase activity (2008)
  • Author(s): Zhiying You and Hisao Masai
  • Organizer: EMBO Conference on "Replication & Segregation of Chromosomes"
  • Place of Presentation: Geilo, Norway
• [Presentation] Interaction of Mcm complexes with Cdt1 protein : Effect of Cdt1 on Mcm helicase activity (2008)
  • Author(s): Zhiying You and Hisao Masai
  • Organizer: 6th 3R (Replication, Recombination, Repair) symposium
  • Place of Presentation: Tsumagoi, Shizuoka
• [Presentation] EBウィルス oriP上への無細胞系pre-RC構築 (2008)
  • Author(s): 森山賢治, 高井裕子, 正井久雄
  • Organizer: 日本分子生物学会(BMB)2008
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
• [Presentation] クランプローダー複合体とMCMサブ複合体の相互作用解析 (2008)
  • Author(s): 谷口莉菜, Zhiying You, 正井久雄, 釣本敏樹
  • Organizer: 日本分子生物学会(BMB)2008
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
• [Presentation] Cdt1はMCMヘリカーゼと複合体を形成し,そのヘリカーゼ活性を促進する (2008)
  • Author(s): Zhiying You
  • Organizer: 第19回DNA複製・分配ワークショプ
  • Place of Presentation: 静岡県伊豆市・ラフォーレ修善寺
• [Presentation] Cdt1 forms a complex with MCM and activates its helicase activity (2008)
  • Author(s): Zhiying You, Hisao Masai
  • Organizer: EMBO Conference on“Replication & Segregation of Chromosomes"
  • Place of Presentation: Geilo, Norway
• [Presentation] Interaction of Mcm complexes with Cdt1 protein : Effect of Cdt1 on Mcm helicase activity (2008)
  • Author(s): Zhiying You, Hisao Masai
  • Organizer: 3R (Replication, Recombination, Repair) symposium
  • Place of Presentation: Tsumagoi, Shizuoka
• [Presentation] EBウィルス oriP 上への無細胞系 pre-RC 構築 (2008)
  • Author(s): 森山賢治, 高井裕子, 正井久雄
  • Organizer: 日本分子生物学会(BMB)2008
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
• [Presentation] Cdt1はMCMヘリカーゼと複合体を形成し,そのヘリカーゼ活性を促進する (2008)
  • Author(s): Zhiying You
  • Organizer: 第19回DNA複製・分配ワークショプ
  • Place of Presentation: 静岡県伊豆市・ラフォーレ修善寺(oral)
• [Book] "MCMタンパク質のDNA複製における役割" 実験医学増刊号「染色体サイクル」25 (2007)
  • Author(s): Zhiying You, 正井久雄
• [Book] UV クロスリンキング法" 実験医学別册「分子間相互作用解析バンドブック」19 (2007)
  • Author(s): Zhiying You, 正井久雄