Expression of recombinant AMV reverse transcriptase and improvement of its productivity, activity, and stability by protein engineering

• Project/Area Number: 19580104
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Applied biochemistry
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: YASUKAWA Kiyoshi Kyoto University, 大学院・農学研究科, 准教授 (30397559)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥2,730,000 (Direct Cost: ¥2,100,000、Indirect Cost: ¥630,000); Fiscal Year 2008: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2007: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: 酵素利用学 / ウイルス / 核酸 / 酵素 / 酵素反応 / バイオテクノロジー

Research Abstract

AMV逆転写酵素はMMLV 逆転写酵素よりも熱安定性が高く、鋳型プライマーにより強く安定化された。昆虫細胞を宿主として組換えAMV 逆転写酵素を発現させた。変異Asp505→Ala を導入するとAMV 逆転写酵素の熱安定性が向上した。

Research Products

• [Journal Article] Characterization of Moloney murine leukaemia virus/avian myeloblastosis virus chimeric reverse transcriptases (2009)
  • Author(s): Yasukawa, K., Mizuno, M., Inouye, K.
  • Journal Title: J. Biochem 145 Pages: 315-324
  • NAID: 10024914963
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Characterization of Moloney murine leukaemia virus/avian myeloblastosis virus chimeric reverse transcriptases (2009)
  • Author(s): Yasukawa, K., Mizuno, M, Inouve, K.
  • Journal Title: J. Biochem. 145 Pages: 315-324
  • NAID: 10024914963
• [Journal Article] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2008)
  • Author(s): Yasukawa, K., Nemoto, D., Inouye, K.
  • Journal Title: J. Biochem 143 Pages: 261-268
  • NAID: 10024908383
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriPtases fromavian myeloblastosis virus and Moloney murine leukemia virus (2008)
  • Author(s): Yasukawa, K., Nemoto, D., Inouye, K.
  • Journal Title: J. Biochem. 143 Pages: 261-268
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 昆虫細胞で発現させた組換えAMV 逆転写酵素αサブユニットの熱安定性 (2009)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: マリンメッセ福岡
  • Year and Date: 2009-03-29
• [Presentation] MMLV およびAMV 逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質の決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: マリンメッセ福岡
  • Year and Date: 2009-03-29
• [Presentation] 逆転写酵素の活性と熱安定性 (2009)
  • Author(s): 保川清
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会大会(シンポジウム : 核酸に関わる酵素の化学-基礎から応用まで)
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場
  • Year and Date: 2009-03-29
• [Presentation] 昆虫細胞で発現させた組換えAMV逆転写酵素αサブユニットの熱安定性 (2009)
  • Author(s): 根本大資, 保川清, 井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場
  • Year and Date: 2009-03-29
• [Presentation] MMLVおよびAMV逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質の決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴, 保川清, 井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場
  • Year and Date: 2009-03-29
• [Presentation] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2008)
  • Author(s): 保川清、根本大資、井上國世
  • Organizer: 2008年度日本分子生物学会・日本生化学会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus. (2008)
  • Author(s): 保川清, 根本大資, 井上國世
  • Organizer: 2008年度日本分子生物学会・日本生化学会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] 昆虫細胞を宿主とした組換えAMV 逆転写酵素の発現 (2008)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • Place of Presentation: 京都学園大学
  • Year and Date: 2008-09-13
• [Presentation] MMLV およびAMV 逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質 (2008)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • Place of Presentation: 京都学園大学
  • Year and Date: 2008-09-13
• [Presentation] 昆虫細胞を宿主とした組換えAMY逆転写酵素の発現 (2008)
  • Author(s): 根本大資, 保川清, 井上國世
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • Place of Presentation: 京都学園大学
  • Year and Date: 2008-09-13
• [Presentation] MMLVおよびAMV逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質 (2008)
  • Author(s): 水野匡貴, 保川清, 井上國世
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • Place of Presentation: 京都学園大学
  • Year and Date: 2008-09-13
• [Presentation] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性に関する熱力学的研究 (2008)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2008年度日本生化学会近畿支部大会
  • Place of Presentation: 大阪市立大学杉本キャンパス
  • Year and Date: 2008-05-24
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素の熱安定性に関する熱力学的研究 (2008)
  • Author(s): 根本大資, 保川清, 井上國世
  • Organizer: 2008年度日本生化学会近畿支部例会
  • Place of Presentation: 大阪市立大学 杉本キャンパス
  • Year and Date: 2008-05-24
• [Presentation] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性の比較 (2008)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 名城大学天白キャンパス
  • Year and Date: 2008-03-28
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素の熱安定性の比較 (2008)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 日本農芸化学会2008年度(平成20年度)大会
  • Place of Presentation: 名城大学天白キャンパス
  • Year and Date: 2008-03-28
• [Presentation] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性に関する比較研究 (2007)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2007年度日本農芸化学会関西支部・中部支部合同大会
  • Place of Presentation: 中部大学
  • Year and Date: 2007-09-22
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素の熱安定性の比較 (2007)
  • Author(s): 根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 日本農芸化学会2007年度関西・中部支部合同大会
  • Place of Presentation: 中部大学春日井キャンパス
  • Year and Date: 2007-09-22
• [Book] 産業酵素の応用技術と最新動向(井上國世、監修)シーエムシー出版、東京 (2009)
  • Author(s): 保川清
  • Publisher: 核酸増幅法
• [Book] 産業酵素の応用技術と最新動向(井上國世、監修) (2009)
  • Author(s): 保川清
  • Total Pages: 345
  • Publisher: シーエムシー出版