Development of an NMR strategy for the structural analysis of themolecular recognition in the membrane protein complex in lipidbilayers
| Project/Area Number |
19590037
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
Physical pharmacy
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
OSAWA Masanori The University of Tokyo, 大学院・薬学系研究科, 助教 (60361606)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
SHIMADA Ichio 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (70196476)
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| Project Period (FY) |
2007 – 2008
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2008)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2008: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
Fiscal Year 2007: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
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| Keywords | 膜蛋白質 / 分子認識 / NMR / 構造生物学 / 相互作用解析 |
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| Research Abstract |
脂質二重膜中の膜蛋白質はビーズに固定化することにより、安定性が劇的に向上するが、不溶性成分の共存によりNMRシグナルの広幅化・感度の低下が問題となっていた。そこで、マジック角回転(MAS)による高感度化・高分解能化を目指した。
本研究では、高速MASに耐えることができ、広い固・液界面が確保可能な固定化担体を幅広く比較検討した結果、CM-シリカビーズを見出した。
次に、ユビキチン(Ub)と酵母Ub水酸化酵素(YUH)の相互作用系において、YUHをCMシリカビーズに固定化し、不均一系超分子を模倣した系を作成した。このYUH固定化Zn-NTAシリカビーズを均一2H15N標識したUbの溶液に懸濁し、MAS 条件下で転移交差飽和法の測定を試みたところ、従来法では解析が困難であった固体と液体が共存した超分子系において、Ub 上のYUH 結合界面残基の同定に成功した。
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Report
(3 results)
Research Products
(42 results)
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[Journal Article] Chondroitin sulfate E fragmentsenhance CD44 cleavage andCD44-dependent motility in tumor cells2008
Author(s)
Sugahara K. N., Hirata T., Tanaka T., Ogino S., Takeda M., Terasawa H., Shimada I, Tamura J, ten Dam GB, vanKuppevelt TH, Miyasaka M.
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Journal Title
Cancer Res. 68
Pages: 7191-7199
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[Journal Article] Nickel binding to NikA : anadditional binding site reconcilesspectroscopy, calorimetry andcrystallography2007
Author(s)
Addy C, Ohara M, Kawai F, Kidera A,Ikeguchi M, Fuchigami S, Osawa M,Shimada I, Park SY, Tame JR andHeddle JG.
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Journal Title
Acta Crystallogr D BiolCrystallogr 63
Pages: 221-229
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