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あらゆる遺伝子を標的にできるsiRNAトランスジェニックマウスの新規作製方法

Research Project

Project/Area Number 19650103
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Laboratory animal science
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

叶内 匡  Tokyo Medical and Dental University, 医学部付属病院, 助教 (50345287)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 横田 隆徳  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (90231688)
Project Period (FY) 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
Fiscal Year 2007: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
KeywordssiRNA / トランスジェニックマウス / shRNA / SOD1 / モデルマウス / shRNA毒性
Research Abstract

抑制効果の異なる複数のESクローンからTgマウスを作製し、ES細胞レベルで1ucifbrase assayによって得られた抑制効果が、マウスレベルでの抑制効果を反映していることを確認するために、SODl-siRNA発現ES細胞のうち、抑制効果が低いクローン(#7)、中等度のクローン(#8、27)、高いクローン(#23)を用い、従来と同じ方法(図2)で計4ラインからそれぞれのキメラマウスを作製した。このオスキメラマウスとメスC57/B6とを体外受精も含めて掛け合わせてF1:siRNATgマウスを試みたが、産児のすべてにトランスジーンが確認できなかった。ES細胞の保存期間が2年を過ぎたことに原因がある可能性を考え、再度SOD1-siRNAをマウス 129 系 ES 細胞にelectroporation して有効なクローンを得ている。また、平行してES細胞に未発現のアンギアゲニン遺伝子を標的としたsiRNAを設計し、ES細胞に導入後、アンギアゲニン遺伝子とRenilla luciferase遺伝子を融合した発現ベクターをco-transfection し、luciferase assayを行うことにより、ES細胞レベルの抑制効果を評価し、抑制効果の得られたES細胞が選択できて、そのキメラマウスが作製できた。しかし、このキメラマウスからもいままでのところgermline transmissionが確認できていない。これらの原因としてshRNA毒性による精子形成に障害がある可能性を考えて、現在polII系promotor下にmiRNA backboneのshRNAを設計して、新たなRNAiトランスジェニックマウスの作製を始めた。

Report

(1 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2008 2007

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Efficient In Vivo Delivery of siRNA to the Liver by Conjugation of α-Tocopherol2008

    • Author(s)
      Kazutaka Nishina, Toshinori Unno, Yoshitaka Uno, Takayuki Kubodera, Tadashi Kanouchi, Hidehiro Mizusawa Takanori Yokota
    • Journal Title

      Molecular Therapy 16

      Pages: 734-740

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model by transgenic small interfering RNA2007

    • Author(s)
      Yokota T, Sasaguri H, Saito Y, Yamada H, Unno N, Yamamoto T, Kubodera T, Anzai M, Mitani T, Mizusawa H.
    • Journal Title

      Archives Neurology 64

      Pages: 145-146

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] siRNA干渉によるALSの治療戦略2007

    • Author(s)
      横田隆徳
    • Journal Title

      Brain and Nerve 59

      Pages: 1187-1194

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] ES細胞を用いた新しいsiRNAトランスジェニックマウスの作製方法の開発2007

    • Inventor(s)
      横田隆徳 三谷匡 笹栗弘貴 水澤英洋
    • Industrial Property Rights Holder
      近畿大学
    • Filing Date
      2007-05-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

URL: 

Published: 2007-04-01   Modified: 2016-04-21  

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