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リガンドスクリーニングのためのケミカルプロテオミクス手法の開発

Research Project

Project/Area Number 19651089
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Living organism molecular science
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

酒井 寿郎  The University of Tokyo, 先端科学技術研究センター, 特任教授 (80323020)

Project Period (FY) 2007 – 2008
Project Status Completed (Fiscal Year 2008)
Budget Amount *help
¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
Fiscal Year 2008: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2007: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywordsケミカル / ネイティブ蛋白 / 核内受容体 / 高親和性抗体 / 転写複合体
Research Abstract

微量に存在する核内受容体蛋白質をターゲットに高親和性抗体-磁気ビーズを用いたプロテオミクスを行うことで、複合体のストイキオメトリーを壊さずに、転写複合体が構造の類似した合成リガンドの濃度・時間によって遷移する様を追跡する系を樹立した。本研究ではバキュロウィルス上に融合蛋白を発現させた蛋白質を免疫する方法によって作成した高親和性抗体(Kd 10-8以下)を低ノイズ磁気ビーズに固定化させ、サンプル調整を行うことにより、現在のプロテオミクス解析を更に効果的なものとした。 3T3-L1脂肪細胞では、スプライソゾームや蛋白のinitiation complexに関わる蛋白など、これまであまり報告のない蛋白が再現良く取れた。さらに、生体内の核内受容体によるシグナルはリガンドの多様性により決定されることから、PPARγの合成された種々近縁の多様なアゴニストリガンドによって変動するデータを比較検討することを行っている。これはアゴニスト作用のある種々類似の薬剤でのプロテオミクスは、大量のデータを意味づけるうえで重要である。しかしながら、PGC1やその他、よく知られたmediator複合体などが逆に検出することが出来なかった。これまでの過剰発現系で見られてきた複合体がネイティブ蛋白レベルで見られない理由については不明である。本研究ではネイティブ蛋白とのストイキオメトリュに重きを置いた研究であるが、アゴニストリガンドによる変動も必ずしも再現が取れるわけではなく更なる最適化が必要である。また、今回新たにPPAγはRXRαのみならずRXRβと複合体を形成することが明らかにされた。さらに、mRNA transportとmRNA locanzationにかかわるミオシン、Translation initiationにかかわるEIF4ファミリーも検出された。ただしこれらは通常細胞質に存在する蛋白であるため、さらに注意深い検討が必要である。CTCFとの複合体コンプレックスも見られ、PPARγの広範囲な機能が推測された。

Report

(2 results)
  • 2008 Annual Research Report
  • 2007 Annual Research Report
  • Research Products

    (10 results)

All 2009 2008 2007

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] PPARγ/RXRα heterodimer targets genes of histone modification enzymes Setd8 and regulates adipogenesis through a feed-back mechanism2009

    • Author(s)
      Wakabayashi K, et al.
    • Journal Title

      Mol Cell Biol(掲載確定) (in press)

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] COUP-TFII acts downstream of Wnt/β-catenin signal to snence PPARγ gene expression and repress adipogenesis2009

    • Author(s)
      Okamujra M, et al.
    • Journal Title

      Proc Natl Acad Sci USA 106

      Pages: 5819-5824

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Fasting-induced hypothermia and reduced energy production in mice lacking acety1-COA synthetase 22009

    • Author(s)
      Sakakibara I, et al.
    • Journal Title

      Cell Metabolism 9

      Pages: 191-202

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] New Therapeutic Target for Metabolic Syndrome:PPARdelta2007

    • Author(s)
      Takahashi S, Tanaka T, Sakai J
    • Journal Title

      Endocr J 54

      Pages: 347-357

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cooperative Interaction between Hepatocyte Nuclear Factor 4{alpha}and GATA Transcription Factors Regulates ATP-Binding Cassette Sterol Transporters ABCG5 and ABCG82007

    • Author(s)
      Sumi K, Sakai J et.al.
    • Journal Title

      Mol Cell Biol 27

      Pages: 4248-4260

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Expression of liver X receptor alpha in rat fetal tissues at different developmental stages.2007

    • Author(s)
      Sakamoto A, Sakai J et.al.
    • Journal Title

      J Histochem Cytochem 55

      Pages: 641-649

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] SOX6 Suppresses Cyclin DI Promoter Activity by Interacting with beta-Catenin and Histone Deacetylase 1, and Its Down-regulation Induces Pancreatic beta-Cell Proliferation.2007

    • Author(s)
      Iguchi H, Sakai J et.al.
    • Journal Title

      J Biol Chem 282

      Pages: 19052-19061

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] PPARγ/RXRα heterodimer targets genes of histone modification enzymes PR-Set7/Setd8 and regulates adipogenesis through positive feed-back loop2009

    • Author(s)
      Juro Sakai
    • Organizer
      Keystone Symposia
    • Place of Presentation
      Vancouver, British Colombia, Canada
    • Year and Date
      2009-02-27
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Presentation] COUP-TFII acts downstream of Mnt/β-catenin signal to Silence PPARγ gene expression and repress adipogenesis2008

    • Author(s)
      Juro Sakai
    • Organizer
      第31回日本分子生物学会、第81回日本生化学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2008-12-09
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Presentation] ケトン体代謝をになうアセチルCo-A合成酵素欠損マウス坑肥満効果の分子基盤の解析2007

    • Author(s)
      酒井寿郎
    • Organizer
      第80回日本内分泌学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2007-06-15
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2007-04-01   Modified: 2016-04-21  

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