マンガンペルオキシダーゼによる異常プリオン感染性の消去とメカニズム解明

Research Project

Project/Area Number	19658069
Research Category	Grant-in-Aid for Exploratory Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	林産科学・木質工学
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	堤祐司 Kyushu University, 農学研究院, 准教授 (30236921)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	毛利資郎独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生研究所・プリオン病研究センター, センター長 (40117271)
Project Period (FY)	2007 – 2008
Project Status	Completed (Fiscal Year 2008)
Budget Amount *help	¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000) Fiscal Year 2008: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000) Fiscal Year 2007: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Keywords	菌類 / 酵素 / プリオン / リグニン
Research Abstract	プリオン病を発病したmouse(C57BL/6J)より採取した脳(Fukuoka-1株)をプリオン脳乳剤として用い、MnPによるPrPRes処理条件を詳細に検討した、その結果、MnPによるPrPResの分解条件はMnP60U/well,GOD8〜25U/well,MnSO4 20mMが最適であることが判明し、この条件下では6時間処理でPrPResの分解が可能であることをウェスタンブロッティング(WB)により確認した。また、異なるブリオン株として、ヒツジのスクレイピー由来マウス順化株であるRML株、およびウンBSE株のMnP処理を行ったところ、先の処理条件でRML株およびBSE株ともにPrPResの消失をWBにより確認した。 MnP処理後のFukuoka-1株由来PrPResをマウス脳内および腹腔内へ投与し、感染性評価を行った結果、腹腔内投与では、弱いながら感染性の残存を確認した、また、マウス脳内投与実験は現在も継続中である。マウスブリオンタンパクをコードする遺伝子(aa23-230)を組み込んだE coli (XL1-blue)によりrecPrPを大量発現させ、得られた精製recPrPをMnP処理したところ20分以内に完全に消失した、一方、得られたrecPrPのβシート構造への変換を試みた結果、プロテアーゼK耐性フリオンの生成は確認されなかった。