遺伝子発現を指標にした卵質評価方法の開発

• Project/Area Number: 19658072
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: General fisheries
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 鈴木 徹 Tohoku University, 大学院・農学研究科, 教授 (70344330)
• Project Period (FY): 2007 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2009: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2008: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2007: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 卵質 / 種苗生産 / レチノイン酸 / アリル炭化水素受容体 / 脊椎骨 / レチノイン酸受容体 / アリル炭化永素受容体 / 卵巣培養 / 顕微注入 / レチノイド / カロテノイド

Research Abstract

昨年度、FITC標識したビテロゲニン(Vg)を用い、Vgの卵母細胞への取り込みを蛍光でモニターする技術を開発した。さらに培養条件下でFITC-Vgが取り込まれれば、卵母細胞を培養条件下で発生し、ビタミンA等の栄養素が卵成熟に及ぼす影響を培養条件下で解析できるのではと着想した。FITC-Vgを加えた培地でゼブラフィッシュの卵母細胞を培養したが、残念ながらFITC-Vgは濾胞細胞の表面で留まって卵母細胞には取り込まれず、想定した培養系は実現しなかった。環境水中の汚染物質が胚に及ぼす影響を調べることを目的として、ダイオキシンに代わる標準毒性化合物であるジクロロアニリン(DCA)に胚を曝露して、シトクロムP450系酵素(cyp1aとアリル炭化水素受容体ahrの発現を解析した。その結果、孵化前の胚ではDCAによってcyp1aの発現が体表の表皮細胞で強力に誘導され、ahrの発現は変動しないことが分かった。cyp1aの発現により、環境汚染物質の胚への影響をモニターできる可能性が考えられた。メダカ胚を用いた実験で、過剰なレチノイン酸(RA)は脊椎骨融合を起こし、RA欠乏は脊椎骨の低形成を起こすことが分かったので、RAの脊椎骨発生における役割を解析することを目的として、RA合成酵素raldh2、RA分解酵素qyp26a1、RA受容体rara1、RA応答遺伝子shhの発現をトラフグ仔魚で解析した。raldh2は脊椎骨に隣接する脊髄と腹大動脈で発現し、rara1は脊椎骨を形成する骨芽細胞で発現し、shhは権間靱帯および脊索鞘を挟んで位置する脊索細胞で発現することが分かった。これらの結果から、背骨の発生に必要なRAは脊髄と腹題動脈から供給され、主に椎体を形成する骨芽細胞と椎間板部分で利用されているものと考えられた。

Research Products

• [Journal Article] Evaluation of the effects of retinoids and carotenoids on egg quality using a microinjection system (2008)
  • Author(s): 芳賀聡
  • Journal Title: Aquaculture 282 Pages: 111-116
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] トラフグRALDH2のクローニング-魚類ビタミンAの胚発生での役割解明に向けて- (2008)
  • Author(s): 宇治督
  • Journal Title: 水産総合研究センター研究報告 24 Pages: 41-46
• [Journal Article] Identification, cDNA cloning, and mRNA localization of a zebrafish ortholog of leukemia inhibitory factor (2007)
  • Author(s): 阿部 崇志
  • Journal Title: Comparative Biochemistry and Physiology, Part B 147 Pages: 38-44
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of 3,4-dichloroaniline on expression of ahr2 and cyplal in zebrafish adults and embryos
  • Author(s): 伊藤淑恵、松田洋平、鈴木徹
  • Journal Title: Comparative Biochemistry and Physiology, Part C. Toxicology & Pharmacology (未定, 印刷中) Pages: 2010-2010
• [Presentation] ゼブラフィッシュ胚発生においてDNA新規メチル化がoct4遺伝子の発現に与える影響の解析 (2010)
  • Author(s): 阿部光太、橋本寿史、鈴木徹
  • Organizer: 平成22年度日本水産学会春季大会
  • Place of Presentation: 日本大学生物資源学部
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] ゼブラフィッシュ胚発生におけるDNA(cytosine-5-)-methyltransferase 3 (dnmt3)の発現とoct4遺伝子のプロモーターのメチル化についての解析 (2009)
  • Author(s): 阿部光太、橋本寿史、鈴木徹
  • Organizer: 平成21年度日本水産学会秋季大会
  • Place of Presentation: 岩手県盛岡市
  • Year and Date: 2009-10-02
• [Presentation] スイホウガン(水泡眼)の水泡リンパ液中ビテロゲニンのFITC標識とゼブラフィッシュ卵巣への取り込み (2009)
  • Author(s): 松田陽平、伊藤淑恵、猿渡悦子、橋本寿史、鈴木徹
  • Organizer: 平成21年度日本水産学会秋季大会
  • Place of Presentation: 岩手県盛岡市
  • Year and Date: 2009-10-02
• [Presentation] ゼブラフィッシュにおけるcyplalの正常発現とDCAによる発現誘導の解析 (2009)
  • Author(s): 伊藤淑恵
  • Organizer: 平成21年度日本水産学会春季大会
  • Place of Presentation: 東京海洋大学
  • Year and Date: 2009-03-30
• [Presentation] 細胞の多分化能をモニターするoct3-EGFPトランスジェニックゼブラフィッシュ系列の開発 (2009)
  • Author(s): 三毛門毅
  • Organizer: 平成21年度日本水産学会春季大会
  • Place of Presentation: 東京海洋大学
  • Year and Date: 2009-03-30
• [Presentation] ゼブラフィッシュにおけるLIF、LIFRおよび多分化能マーカーの卵巣および胚ステージにおける発現解析 (2008)
  • Author(s): 三毛門毅
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] GFP-expression vectors inserted with Takifugu Collal, GCH1 and PCNA promoters visualize osteoblats, chromatophore precursors and dividing cells, respectively, in zebrafish (2008)
  • Author(s): 仲野亮
  • Organizer: 第5回世界水産学
  • Place of Presentation: パシフイコ横浜
  • Year and Date: 2008-10-23
• [Presentation] ゼブラフィッシュにおけるAhRおよびCyplaの発現解析 (2008)
  • Author(s): 伊藤淑恵
  • Organizer: 第14回小型魚類研究会
  • Place of Presentation: 基礎生物学研究所
  • Year and Date: 2008-09-20
• [Presentation] ゼブラフィッシュ胚への顕微注入による、抗酸化物質の酸化ストレスに対する耐性付与効果の解析 (2008)
  • Author(s): 鈴木 徹
  • Organizer: 平成20年度日本水産学会春季大会
  • Place of Presentation: 東海大学海洋学部
  • Year and Date: 2008-03-29
• [Presentation] ゼブラフィッシュLIFおよびLIF受容体の同定と発現解析 (2007)
  • Author(s): 三毛門 毅
  • Organizer: 第13回小型魚類研究会
  • Place of Presentation: 東京大学本郷キャンパス
  • Year and Date: 2007-09-16