D-アミノ酸テーラーメイド計測プレートの開発

• Project/Area Number: 19659008
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Physical pharmacy
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 濱瀬 健司 Kyushu University, 大学院・薬学研究院, 准教授 (10284522)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2008: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 2007: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
• Keywords: 薬学 / 分析科学 / 生体分子 / タンパク質

Research Abstract

平成19年度に試作したD-アスパラギン酸、D-ロイシン迅速計測プレートについて、平成20年度では再現性、定量性を評価し、分析法としてのバリデートを行った。アミノ酸標準品による検討では、D-アスパラギン酸計測プレートにおける検量線は1mL当たり0.016から16μmolの範囲で良好な相関を示し、ウェル間における相対標準偏差は4.8%、プレート間における相対標準偏差は4.5%であった。ラット血中D-アスパラギン酸定量についてHPLC法との相関を検討した結果、回帰直線の傾きは1.09、Y切片は0.44であり、ほぼY=Xの直線となった。一方、D-ロイシン計測プレートにおける検量線は血清中濃度にして0.1mMから10mMの範囲で良好な定量性が認められた。ウェル間における相対標準偏差は13.2%であった。両プレートとも、L-アミノ酸による定量妨害は殆ど受けない事が示された。これらのELISAプレートを利用し、ラット血中におけるD-アスパラギン酸とD-ロイシンの動態解析を行った。各D-アミノ酸は頚静脈より投与し、経時的に血中濃度推移を検討した。その結果、D-アスパラギン酸、D-ロイシン共に投与後一分で最高濃度となった後経時的に減少し、D-アスパラギン酸では30分、D-ロイシンは60分で約3分の1に減衰した。これらの定量値はHPLC法による定量値と良く一致しており、本研究において開発したD-アミノ酸計測ELISAプレートは、実試料に適用可能な優れた迅速計測法として今後の利用が期待される。

Research Products

• [Journal Article] Enantioseleotive visualization of D-alanine in rat anterior pituitary gland : localization to ACTH-secreting cells (2009)
  • Author(s): Sachise ETOH, Kenji HAMASE, et al.
  • Journal Title: Analytical and Bioanalytical Chemistry 393 Pages: 217-223
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Simple and rapid genotyping of D-amino acid oxdase gene recognizing a crucial variant in the ddY strain using microchip electrophoresis (2009)
  • Author(s): Yosuke TOJO, Kenji HAMASE, et al.
  • Journal Title: Journal of Separation Science 32 Pages: 430-436
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Circadian changes of D-alanine and related compounds in rats and the effect of restricted feeding on their amounts (2008)
  • Author(s): Akiko MORIKAWA, Kenji HAMASE, et al.
  • Journal Title: Journal of Chromatography B 875 Pages: 168-173
  • NAID: 10028008387
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Automated and simultaneous two-dimensional micro-high-performance liquid chromatographic determination of proline and hydroxyproline enantiomers in mammals (2008)
  • Author(s): Yosuke TOJO, Kenji HAMASE, et al.
  • Journal Title: Journal of Chromatography B 875 Pages: 174-179
  • NAID: 10028008429
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Circadian changes of D-alanine and related compounds in rats and theeffect of restricted feeding on their amounts (2008)
  • Author(s): Akiko MORIKAWA, Kenji HAMASE, et. al.
  • Journal Title: Journal of Chromatography B (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Immunohistochemical localization of D-alanine to β-cells in rat pancreas (2007)
  • Author(s): Akiko MORIKAWA, Kenji HAMASE, et. al.
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications 355 Pages: 872-876
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Comprehensive enantiomer analysis of all proteinogenic amino acids using fully automated two-dimensional micro-HPLC (2008)
  • Author(s): Kenji HAMASE, et al.
  • Organizer: 32^<nd> International Symposium on High Perform ance Liquid Phase Separations and Related Techniques
  • Place of Presentation: Baltimore, USA
• [Presentation] Rapid enantiomer separations of all proteinogenic amino acids and their comprehensive 2D-HPLC determination in biological samples (2008)
  • Author(s): Kenji HAMASE, et al.
  • Organizer: 2O^<th>International Symposium on Chirality
  • Place of Presentation: Geneva, Switzerland
• [Presentation] 哺乳類における微量D・アミノ酸の二次元一斉分析法構築 (2008)
  • Author(s): 浜瀬健司, 他
  • Organizer: 第4回D-アミノ酸研究会学術講演会
  • Place of Presentation: 名古屋
• [Presentation] Two-dimensional HPLC analysis of D-amino acids in mammals (2008)
  • Author(s): Kenji HAMASE, et al.
  • Organizer: 33^<rd> International Symposium on High Performanoe Liquid Phase Separations and Related Techniques
  • Place of Presentation: Kyoto, Japan
• [Presentation] タンパク質構成全アミノ酸光学異性体の二次元HPLC一斉分析と哺乳類体内含量の解析 (2008)
  • Author(s): 浜瀬健司, 他
  • Organizer: 第81回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸
• [Presentation] Establishment of a Comprehensive Micro-2D Analysis System for Highly Sensitive Determination of Branched Aliphatic Amino Acid Enantiomers in Human Plasma and Urine (2007)
  • Author(s): Kenji Hamase, et. al.
  • Organizer: 31^<st> International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques
  • Place of Presentation: Ghent, Belgium
• [Presentation] Ultra-sensitive determination of multiple D-amino acids in mammals using two-dimensional micro-HPLC with fluorescence detection (2007)
  • Author(s): Kenji Hamase, et. al.
  • Organizer: 10^<th> International Congress on Amino Acids and Proteins
  • Place of Presentation: Kallithea, Greece
• [Presentation] アミノ酸光学異性体の高感度二次元HPLC分析法開発と哺乳類体内におけるD-アミノ酸の可能性 (2007)
  • Author(s): 浜瀬 健司
  • Organizer: 第207回液体クロマトグラフィー研究懇談会
  • Place of Presentation: 野田市
• [Presentation] 二次元HPLCを用いる哺乳類体内の微量D-アミノ酸分析 (2007)
  • Author(s): 浜瀬 健司, 財津 潔
  • Organizer: 第80回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 横浜市
• [Book] 薬学分析科学の最前線 (2009)
  • Author(s): 浜瀬 健司, 他
  • Total Pages: 185
  • Publisher: 株式会社 じほう