Efficient synthesis of glycoprotein by using mutant enzymes

• Project/Area Number: 19780252
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Applied molecular and cellular biology
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: FUJITA Kiyotaka Kagoshima University, 農学部, 助教 (20381189)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,440,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2008: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2007: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
• Keywords: タンパク質 / 糖鎖工学 / エンドグリコシダーゼ / endo-β-N-acetylglucosaminidase / 糖転移 / Endo-A / Endo-M / 糖タンパク質 / 変異酵素 / 糖ペプチド / ケミカルレスキュー / glycosynthase / neoglycoconjugate

Research Abstract

本研究ではエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼが持つ糖タンパク質の糖鎖をすげ替える能力を変異導入により高めることを目的とし、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-M(Endo-M)のN173A変異酵素と酵素反応中間体であるオキサゾリン合成基質を組み合わせることにより、効率的な糖鎖転移方法の開発に成功した。また、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-A(Endo-A)のN171G変異酵素を用いることで、糖タンパク質への糖鎖転移活性を10倍高めることに成功した。本変異酵素を利用することにより、糖ペプチド及び糖タンパク質への糖鎖の導入効率を高めることができた。

Research Products

• [Journal Article] Mutants of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase show enhanced transglycosylation and glycosynthase-like activities (2008)
  • Author(s): Umekawa, M., Huang, W., Li, B., Fujita, K., Ashida, H., Wang, L. X., and Yamamoto, K.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. 283 Pages: 4469-4479
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mutants of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase show enhanced transglycosylation and glycosynthase-like activities. (2008)
  • Author(s): Umekawa, M., Huang, W., Li, B., Fujita, K., Ashida, H., Wang, L. X., and Yamamoto, K.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. 283 Pages: 4469-4479
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter endo-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant (2007)
  • Author(s): Fujita, K., Sato, R., Toma, K., Kitahara, K., Suganuma, T., Yamamoto, K., and Takegawa, K.
  • Journal Title: J. Biochem. 142 Pages: 301-306
  • NAID: 10020096397
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter end o-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant. (2007)
  • Author(s): Fujita, K., Sato, R., Toma, K., Kitahara, K., Suganuma, T., Yamamoto, K., and Takegawa, K.
  • Journal Title: J. Biochem. 142 Pages: 301-306
  • NAID: 10020096397
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 部位特異的変異導入によるendo-β-NacetylglucosaminidaseA(Endo-A)の糖転移効率の向上 (2008)
  • Author(s): 藤田清貴、北原兼文、菅沼俊彦、山本憲二、竹川薫
  • Organizer: 第28回日本糖質学会年会
  • Place of Presentation: つくば
  • Year and Date: 2008-08-19
• [Presentation] 部位特異的変異導入によるendo-β-N-acetylglucosaminidase A(Endo-A)の糖転移効率の向上 (2008)
  • Author(s): 藤田清貴、北原兼文、菅沼俊彦、山本憲二、竹川薫
  • Organizer: 第28回日本糖質学会年会
  • Place of Presentation: つくば
  • Year and Date: 2008-08-19