Monitoring of inositol 1,4,5-trisphosphate dynamics in cultured parotid cells using a fluorescent biosensor

• Project/Area Number: 19791369
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Functional basic dentistry
• Research Institution: Health Sciences University of Hokkaido
• Principal Investigator: NEZU Akihiro Health Sciences University of Hokkaido, 歯学部, 講師 (00305913)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,460,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2008: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2007: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
• Keywords: イノシトール三リン酸(IP3) / 細胞内Ca2+濃度 / 唾液腺細胞 / 唾液分泌 / 細胞内情報伝達機構 / 受容体 / イノシトール三リン酸 / 耳下腺腺房細胞 / 細胞内カルシウム濃度 / 初代培養 / 遺伝子導入

Research Abstract

本研究は、我々の開発したIP3分子センサーLIBRAを唾液腺細胞に導入し、刺激によるIP3動態を明らかにすることを目的とする。LIBRAを腺房細胞に発現させるため、その初代培養法を検討した。培養細胞が腺房細胞としての形態と機能を保持していることを確かめ、腺房細胞へのGFP付加蛍光タンパク質の導入に成功した。またpH抵抗性の改良型LIBRAを開発した。細胞培養法をさらに改良し、改良型LIBRAにより培養腺房細胞のIP3動態を解析中である。

Research Products

• [Journal Article] Use of Fluorescence Resonance Energy Transfer-based Biosensors for the Quantitative Analysis of Inositol 1,4,5-Trisphosphate Dynamics in Calcium Oscillations (2009)
  • Author(s): Tanimura A, Morita T, Nezu A, Shitara A, Hashimoto N, Tojyo Y
  • Journal Title: J Biol Chem 284(13) Pages: 8910-7
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A conserved hydrophobic tetrad near the C terminus of the secretory Na+-K+-2C1- cotransporter (NKCC1) is required for its correct intracellular processing (2009)
  • Author(s): Nezu A., et.al
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry 284 Pages: 6869-6876
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Use of fluorescence resonance energy transfer-based biosensors for the quantitative analysis of inositol 1, 4, 5-trisphosphate dynamics in calcium oscillations (2009)
  • Author(s): Tanimura A., et.al
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry 284 Pages: 8910-8917
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The clustering of inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) receptors is triggered by IP3 binding and facilitated by depletion of the Ca2+ store (2008)
  • Author(s): Tojyo Y, Morita T, Nezu A, Tanimura A
  • Journal Title: J Pharmacol Sci 107(2) Pages: 138-50
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The clustering of inositol 1, 4, 5-trisphosphate (IP_3) receptors is triggered by IP_3 binding and facilitated by depletion of the Ca^<2+> store (2008)
  • Author(s): Tojyo Y, et.al
  • Journal Title: Journal of Pharmacological Sciences 107 Pages: 138-150
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Multi-photon microscopic imaging of rat parotid ducts demonstrates cellular heterogeneity in Ca2+ responsiveness (2007)
  • Author(s): Shitara A, Tanimura A, Nezu A, Morita T, Tojyo Y
  • Journal Title: Arch Oral Biol 52(11) Pages: 1072-1078
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Multi-photon microscopic imaging of rat parotid ducts demonstratescellular heterogeneity in Ca^<2+> responsiveness. (2007)
  • Author(s): Shitara A., et. al.
  • Journal Title: Archives of Oral Biology 52 Pages: 1072-1078
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 機械刺激による細胞内および細胞間Ca^<2+>ウェーブ発生時におけるIP_3濃度変化のリアルタイム (2009)
  • Author(s): 根津顕弘, 他
  • Organizer: 第82回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 神奈川
  • Year and Date: 2009-03-17
• [Presentation] FRET型バイオセンサーを用いたカルシウムオシレーションにおけるIP_3動態の定量的解析 (2009)
  • Author(s): 谷村明彦, 他
  • Organizer: 第82回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 神奈川
  • Year and Date: 2009-03-16
• [Presentation] 機械刺激による細胞間のCa^<2+>ウェーブとIP_3動態のリアルタイム測定 (2009)
  • Author(s): 根津顕弘, 他
  • Organizer: 北海道医療大学歯学会第27回学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2009-02-28
• [Presentation] 機械刺激による細胞内および細胞間Ca2+ウェーブ発生におけるIP3濃度変化のリアルタイムモニター (2009)
  • Author(s): 根津顕弘、谷村明彦、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 第89回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 神奈川
• [Presentation] FRET型バイオセンサーを用いたカルシウムオシレーションにおけるIP3動態の定量的解析 (2009)
  • Author(s): 谷村明彦、森田貴雄、根津顕弘、東城庸介
  • Organizer: 第89回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 神奈川
• [Presentation] 機械刺激による細胞間のCa2+ウェーブとIP3動態のリアルタイム測定 (2009)
  • Author(s): 根津顕弘、谷村明彦、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 北海道医療大学歯学会第27回学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
• [Presentation] 機械刺激によって惹起される細胞内および細胞間Ca^<2+>ウェーブとIP_3動態のリアルタイム測定 (2008)
  • Author(s): 根津顕弘, 他
  • Organizer: 第59回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 宮城
  • Year and Date: 2008-09-27
• [Presentation] 蛍光バイオセンサーにおけるIP_3オシレーションの定量的解析 (2008)
  • Author(s): 谷村明彦, 他
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-09-25
• [Presentation] 機械刺激による細胞内および細胞問Ca^<2+>ウェーブとIP_3動態のリアルタイムモニター (2008)
  • Author(s): 根津顕弘, 他
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-09-24
• [Presentation] ラット耳下腺導管細胞における自発的Ca^<2+>反応の発生機構とその役割 (2008)
  • Author(s): 設楽彰子, 他
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-09-23
• [Presentation] 機械刺激によって惹起される細胞内および細胞間Ca2+ウェーブとIP3動態のリアルタイム測定 (2008)
  • Author(s): 根津顕弘、谷村明彦、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 第59回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 宮城
• [Presentation] 機械刺激による細胞内および細胞間Ca2+ウェーブとIP3動態のリアルタイムモニター (2008)
  • Author(s): 根津顕弘、谷村明彦、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] 蛍光バイオセンサーによるIP3オシレーションの定量的解析 (2008)
  • Author(s): 谷村明彦、森田貴雄、根津顕弘、東城庸介
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] ラット耳下腺導管における自発的Ca2+反応の発生機構とその役割 (2008)
  • Author(s): 設楽彰子、谷村明彦、森田貴雄、根津顕弘、東城庸介
  • Organizer: 第50回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] FRET型バイオセンサーを使ったIP_3受容体リガンド化合物の解析 (2007)
  • Author(s): 谷村 明彦, 他
  • Organizer: 第58回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2007-09-29
• [Presentation] ラット耳下腺導管細胞におけるCa^<2+>反応と管腔拡大におけるその役割 (2007)
  • Author(s): 設楽 彰子, 他
  • Organizer: 第49回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2007-08-30
• [Presentation] FRET型バイオセンサーを使ったIP_3ダイナミクスの解析と薬物スクリーニングへの応用 (2007)
  • Author(s): 谷村 明彦, 他
  • Organizer: 第49回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2007-08-30
• [Presentation] ラット耳下腺導管細胞におけるCa^<2+>反応と管腔拡大 (2007)
  • Author(s): 設楽 彰子, 他
  • Organizer: 第21回北海道薬物作用談話会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2007-07-28
• [Presentation] IP3によって惹起されるGFP-IP3受容体のcluster形成 (2007)
  • Author(s): 東城庸介、森田貴雄、根津顕弘、谷村明彦
  • Organizer: 第35回薬物活性シンポジウム
  • Place of Presentation: 広島
• [Presentation] FRET型バイオセンサーを使ったIP3受容体リガンド化合物の解析 (2007)
  • Author(s): 谷村明彦、根津顕弘、森田貴雄、望月哲也、周東智、東城庸介
  • Organizer: 第58回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 北海道
• [Presentation] FERT型バイオセンサーを使ったIP3ダイナミクスの解析と薬物スクリーニングへの応用 (2007)
  • Author(s): 谷村明彦、森田貴雄、設楽彰子、根津顕弘、東城庸介
  • Organizer: 第49回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
• [Presentation] ラット耳下腺導管細胞におけるCa2+反応と管腔の拡大におけるその役割 (2007)
  • Author(s): 設楽彰子、谷村明彦、根津顕弘、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 第49回歯科基礎医学会学術大会
  • Place of Presentation: 北海道
• [Presentation] ラット耳下腺導管細胞におけるCa2+反応と管腔拡大 (2007)
  • Author(s): 設楽彰子、谷村明彦、根津顕弘、森田貴雄、東城庸介
  • Organizer: 第21回北海道薬物作用談話会
  • Place of Presentation: 北海道
• [Presentation] Improvement of FRET-based IP_3 biosensor and monitoring of IP_3 dynamics during Ca^<2+> oscillations in different cell types. (2007)
  • Author(s): Tanimura A., et. al.
  • Organizer: Gordon Research Conference, Calcium signaling
  • Place of Presentation: NH, USA