The analysis of DNA polymerase activities by using the single molecule observation techniques

• Project/Area Number: 19870003
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Molecular biology
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: OSHIGE Masahiko Gunma University, 大学院・工学研究科, 准教授 (00451716)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,115,000 (Direct Cost: ¥2,710,000、Indirect Cost: ¥405,000); Fiscal Year 2008: ¥1,755,000 (Direct Cost: ¥1,350,000、Indirect Cost: ¥405,000); Fiscal Year 2007: ¥1,360,000 (Direct Cost: ¥1,360,000)
• Keywords: DNA / 酵素 / 1分子解析 / 表面修飾 / 固定技術 / タンパク質 / DNAポリメラーゼ / 核酸 / 酵素反応 / モニタリング

Research Abstract

1分子DNAおよびタンパク質の精密解析を行うために、蛍光顕微鏡視野内で反応を1分子レベルでの測定技術を確立し、解析することを目的とし研究を実施した。
各種DNA合成酵素の単位時間当たりの合成速度計測を行った結果、TaqDNAポリメラーゼは800-900塩基/分、T7DNAポリメラーゼは3000-3200塩基/分、DNAポリメラーゼIは1000-1100塩基/分、DNAポリメラーゼβは2000-2100塩基/分となった。また、DNA合成反応を観察するための1本鎖DNA領域の可視化に成功した。方法は、DNA複製因子AのDNA結合部位と黄色蛍光タンパク質の融合タンパク質を使用することにより1本鎖DNAを安定的に可視化することが可能となった。

Research Products

• [Journal Article] Development of nanoparticle array method by using DNA sequence recognition peptide (2008)
  • Author(s): Oshige, M., Katsumata, M., Iwasaki, D., Yamazaki, K., Katsura, S
  • Journal Title: Kobunshi ronbunsyu 65(7) Pages: 493-495
  • NAID: 10024263655
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Development of nanoparticle array method by using DNA sequence recognition peptide. (2008)
  • Author(s): 大重真彦
  • Journal Title: 1Kobunshi ronbunsyu 65 Pages: 493-495
  • NAID: 10024263655
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 1分子観察法を用いたDNA合成反応解析の試み (2008)
  • Author(s): 山口晃史、高野宏樹、大重真彦、栗田弘史、坂口謙吾、水野彰、桂進司
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] 蛍光Replication Protein A を用いた1本鎖DNAの可視化 (2008)
  • Author(s): 高野宏樹、山口晃史、栗田弘史、大重真彦、水野武、坂口謙吾、水野彰、桂進司
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] 1分子観察法を用いたDNA合成反応解析の試み (2008)
  • Author(s): 大重真彦
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県・神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] 蛍光ReplicationProtein Aを用いた1本鎖DNAの可視化 (2008)
  • Author(s): 大重真彦
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県・神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] 転写型タンパク質アレイ作成のための高密度DNAアレイ作成技術の検討 (2008)
  • Author(s): 大重真彦
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県・神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] 転写型タンパク質アレイ作成のための高密度DNAアレイ作成技術の検討 (2008)
  • Author(s): 中田雅基、湯本和宏、大重真彦、桂進司
  • Organizer: BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会)
  • Place of Presentation: 兵庫県
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] タンパク質のリフォールディングを目指したエマルション調製法 (2008)
  • Author(s): 赤澤祐介、山崎圭樹、大重真彦、桂進司
  • Organizer: 化学工学会第40回秋季大会
  • Place of Presentation: 宮城県
  • Year and Date: 2008-09-24
• [Presentation] タンパク質のリフォールディングを目指したエマルション調製法 (2008)
  • Author(s): 大重真彦
  • Organizer: 化学工学会第40回秋季大会
  • Place of Presentation: 宮城県・東北大学
  • Year and Date: 2008-09-24
• [Patent(Industrial Property Rights)] 核酸固定化担体およびその利用 (2009)
  • Inventor(s): 桂進司、大重真彦
  • Industrial Property Rights Holder: 国立大学法人群馬大学
  • Filing Date: 2009-05-11
• [Patent(Industrial Property Rights)] タンパク質固定化用担体およびその利用 (2008)
  • Inventor(s): 桂進司、大重真彦
  • Industrial Property Rights Holder: 国立大学法人群馬大学
  • Filing Date: 2008-10-28
• [Patent(Industrial Property Rights)] タンパク質固定化用担体およびその利用 (2008)
  • Inventor(s): 桂進司、大重真彦
  • Industrial Property Rights Holder: 群馬大学
  • Industrial Property Number: 2008-275763
  • Filing Date: 2008-10-28