線維芽細胞の血管内皮細胞への分化誘導メカニズムの解明

Research Project

Project/Area Number	19890145
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Plastic surgery
Research Institution	Ehime University
Principal Investigator	大沼俊名愛媛大, 助教 (60452695)
Project Period (FY)	2007 – 2008
Project Status	Completed (Fiscal Year 2008)
Budget Amount *help	¥2,963,000 (Direct Cost: ¥2,570,000、Indirect Cost: ¥393,000) Fiscal Year 2008: ¥1,703,000 (Direct Cost: ¥1,310,000、Indirect Cost: ¥393,000) Fiscal Year 2007: ¥1,260,000 (Direct Cost: ¥1,260,000)
Keywords	線維芽細胞 / 分化誘導 / 血管内皮細胞 / Tie-GFPマウス / 角膜実質
Research Abstract	【目的】皮下結合組織には神経細胞、筋細胞、骨細胞、軟骨細胞など様々な細胞に分化する多能性幹細胞が存在する。しかし、線維芽細胞が血管内皮細胞に分化するという報告はこれまでなされていない。線維芽細胞の血管内皮細胞化メカニズムについては明らかにされておらず、その生物学的意義も不明である。そこで本研究では線維芽細胞が血管内皮細胞へと分化する際の誘導物質の検索と、その誘導メカニズムを解析することを目的とした。【方法】Tie2-GFPマウスの角膜を採取し、組織片から角膜実質に存在する線維芽細胞を分離・培養した。これとは別にマウスの腫瘍細胞株であるLLCとsarcoma細胞をDMEM(10%FCS)にて培養し、培養上清を調製した。また、硝酸銀処理により血管新生を誘導したラット角膜を採取した。これをホモジナイズし血管新生組織由来の組織抽出液を調製した。Tie2-GFP線維芽細胞の培養液中にこれらの培養上清や組織抽出液を添加し、GFP発現の変化を蛍光顕微鏡を用いて解析した。【結果】腫瘍細胞株LLC、sarcomaの培養上清(培養時間24h、48h、72h、96h)を添加した場合、いずれの培養上清によっても角膜線維芽細胞におけるGFP発現量に変化は認められなかった。一方、血管新生組織由来の組織抽出液を添加した場合添加後24時間でGFPが発現し、これは72時間後まで継続することが確認された。【考察】培養上清と組織抽出液とでは異なる結果が得られた。どちらも血管新生を誘導する活性があることがわかっており、Tie2-GFP線維芽細胞におけるGFPの発現を誘導すると予想していたが、これに反し、腫瘍細胞株ではGFPの発現を誘導しなかった。腫瘍細胞株は単一の種類の細胞集団からなりVEGFなどの血管新生誘導因子を発現する。しかし今回の結果より、このような単一の細胞種は線維芽細胞を血管内皮には誘導せず、in vivoにおけるheterogeniousな環境要因が関与している可能性が示唆された。