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Analysis of signal transduction mechanism for methanol-dependent gene expression in methylotrophic yeast

Research Project

Project/Area Number 19J21821
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Review Section Basic Section 38060:Applied molecular and cellular biology-related
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

井上 紘一  京都大学, 農学研究科, 特別研究員(DC1)

Project Period (FY) 2019-04-25 – 2022-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2021)
Budget Amount *help
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 2021: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2020: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2019: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywords転写因子 / メタノール資化性酵母 / リン酸化修飾解析 / シグナル伝達 / 濃度応答性メタノール濃度 / 遺伝子発現制御 / メタノール濃度 / リン酸化修飾 / ペキソファジー / 転写因子Mxr1 / アミノ酸置換 / ドメイン探索 / アナログなシグナル伝達 / 質量分析 / 免疫沈降
Outline of Research at the Start

メタノール資化性酵母(C1酵母)は異種遺伝子発現宿主の利点である細胞増殖能、目的タンパク質の生産量、培養コストの点で優れ、さらに安価な高密度培養法の確立やメタノール誘導性遺伝子プロモーターの特異性・強力さが異種遺伝子発現に適しているといった利点がある。C1酵母にはメタノール濃度に応じた遺伝子発現制御機構が存在し、発現レベルを厳密に制御するためのシグナル伝達機構は単なるONかOFFかだけではない「アナログ(連続的)」であることが示唆されている。本研究では、このアナログなシグナル伝達の分子機構を明らかにし、C1酵母をより効率的な異種遺伝子発現宿主に改良するための標的を見出すことを目指す。

Outline of Annual Research Achievements

本年度の研究では、メタノール資化性酵母K. phaffiiにおいて細胞外界のメタノール濃度に依存した転写活性化因子Mxr1のリン酸化修飾制御に着目し、Mxr1のリン酸化レベルと下流の遺伝子発現(AOX1)との関係についてより詳細に解析した。Mxr1の推定リン酸化部位変異体発現株を用いてAOX1のmRNA量を定量した結果、AOX1の濃度応答性メタノール誘導(CRMI)に重要なリン酸化部位を同定した。また、Mxr1の上流に位置するプロテインキナーゼPkc1の活性化によって、Mxr1のリン酸化レベルも変化することを見出した。これらの結果から、細胞表層で感知されたメタノール濃度情報はPkc1を介して転写因子Mxr1へと伝達され、下流の遺伝子発現を制御するというCRMI経路の分子機構を明らかにした。本研究成果はMolecular Microbiology誌に掲載され、International Union of Microbiological Societies 2022など、国内外の学会で発表した。この他に、K. phaffiiにおける培地中メタノール濃度とペキソファジーの関係についてまとめ、International Congress on Yeasts 15thや第7回 酵母研究若手の会で発表した。
またメタノール資化性酵母C. boidiniiにおいて、メタノール濃度に応じて発現誘導される転写活性化因子Mpp1に着目した。メタノール培養時にMPP1遺伝子の発現制御が適切な量・タイミングで行われないと、CRMIに依存した遺伝子発現やメタノール培地での生育に負の影響を及ぼすことがわかった。さらにMPP1遺伝子の発現制御に重要なプロモーター領域を同定し、MPP1遺伝子の発現調節のメカニズムを明らかにしつつある。本研究成果の一部は日本農芸化学会2022年大会で学会発表した。

Research Progress Status

令和3年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

令和3年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(3 results)
  • 2021 Annual Research Report
  • 2020 Annual Research Report
  • 2019 Annual Research Report
  • Research Products

    (13 results)

All 2022 2021 2020 2019

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (11 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results)

  • [Journal Article] Phosphoregulation of the transcription factor Mxr1 plays a crucial role in the concentration‐regulated methanol induction in <i>Komagataella phaffii</i>2022

    • Author(s)
      Inoue Koichi、Ohsawa Shin、Ito Shinji、Yurimoto Hiroya、Sakai Yasuyoshi
    • Journal Title

      Molecular Microbiology

      Volume: 118 Issue: 6 Pages: 683-697

    • DOI

      10.1111/mmi.14994

    • Related Report
      2021 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Methanol sensor Wsc1 and MAP kinase suppress degradation of methanol-induced peroxisomes in methylotrophic yeast2021

    • Author(s)
      Ohsawa Shin、Inoue Koichi、Isoda Takahiro、Oku Masahide、Yurimoto Hiroya、Sakai Yasuyoshi
    • Journal Title

      Journal of Cell Science

      Volume: - Issue: 9

    • DOI

      10.1242/jcs.254714

    • Related Report
      2020 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] Candida boidiniiにおけるメタノール誘導性転写因子Mpp1の生理機能解析2022

    • Author(s)
      井上 紘一, 岩瀬公佑, 由里本 博也, 阪井 康能
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] DOMAIN ANALYSES AND PHOSPHOREGULATION OF A TRANSCRIPTION FACTOR Mxr1 RESPONSIBLE FOR METHANOL-INDUCED GENE EXPRESSION IN Komagataella phaffii2022

    • Author(s)
      井上紘一, 大澤晋, 由里本博也, 阪井康能
    • Organizer
      International Union of Microbiological Societies
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Komagataella phaffiiにおける転写因子Mxr1のメタノール濃度に依存したリン酸化制御2022

    • Author(s)
      井上紘一, 大澤晋, 由里本博也, 阪井康能
    • Organizer
      酵母遺伝学フォーラム
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] メタノール資化性酵母 Komagataella phaffii におけるメタノール存在下でのペキソファジー抑制機構の解析2021

    • Author(s)
      井上紘一
    • Organizer
      酵母研究若手の会
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] Wsc1 and MAP kinase proteins suppress pexophagy in the methylotrophic yeast Komagataella phaffii2021

    • Author(s)
      井上紘一, 大澤晋, 由里本博也, 阪井康能
    • Organizer
      International Congress on Yeasts 15th
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Komagataella phaffii Wsc1-MAPキナーゼ 経路によるペキソファジー抑制機構の解析2021

    • Author(s)
      井上紘一, 大澤晋, 奥公秀, 由里本博也, 阪井康能
    • Organizer
      酵母遺伝学フォーラム
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] Komagataella phaffiiのメタノール濃度依存的な発現制御における転写因子Mxr1の機能領域の同定2020

    • Author(s)
      ○井上紘一、由里本博也、阪井康能
    • Organizer
      第53回酵母遺伝学フォーラム
    • Related Report
      2020 Annual Research Report
  • [Presentation] Komagataella phaffii 転写活性化因子Mxr1 のメタノール濃度依存性遺伝子発現制御における機能領域の解析2020

    • Author(s)
      ○井上紘一、由里本博也、阪井康能
    • Organizer
      日本農芸化学会2021年大会
    • Related Report
      2020 Annual Research Report
  • [Presentation] Komagataella phaffiiにおけるメタノール誘導性遺伝子発現制御に重要な転写因子Mxr1の機能領域の同定2020

    • Author(s)
      ○井上紘一、由里本博也、阪井康能
    • Organizer
      日本農芸化学会2020年大会
    • Related Report
      2019 Annual Research Report
  • [Presentation] Komagataella phaffiiにおけるメタノール濃度に応答した転写因子Mxr1のリン酸化動態解析2019

    • Author(s)
      ○井上紘一、由里本博也、阪井康能
    • Organizer
      第52回酵母遺伝学フォーラム
    • Related Report
      2019 Annual Research Report
  • [Presentation] Regulation of a transcription factor Mxr1 involved in methanol-dependent gene expression in Komagataella phaffii2019

    • Author(s)
      ○井上紘一、由里本博也、阪井康能
    • Organizer
      JSBBA KANSAI 6th Student Forum
    • Related Report
      2019 Annual Research Report

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Published: 2019-05-29   Modified: 2024-03-26  

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