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Development of artificial microbial complex and its application to the cultivation of unculturable microbes

Research Project

Project/Area Number 19K05170
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 27040:Biofunction and bioprocess engineering-related
Research InstitutionOsaka City University

Principal Investigator

Ojima Yoshihiro  大阪市立大学, 大学院工学研究科, 准教授 (20546957)

Project Period (FY) 2019-04-01 – 2022-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2021)
Budget Amount *help
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Keywords大腸菌 / フロック / グリセロール / ポリオール / degP / OMV / 難培養性微生物 / 複合微生物化 / アンプリコンシーケンス解析 / 活性汚泥 / OD1 / 短鎖ポリオール / 外膜小胞 / エチレングリコール / 機能化
Outline of Research at the Start

本研究では,研究期間に下記の2点に焦点を当て,フロック形成機構の解明と応用展開を並行して進め,基礎的ならびに応用的知見を得る.
Ⅰ. フロック形成機構ならびにポリオールによる形成促進機構の解明(平成31-32年度)
Ⅱ. 大腸菌フロックの複合微生物化と難培養性微生物の取得 (平成31-33年度)
ポリオール添加によってフロック形成が促進するという新たな結果に基づき,大腸菌の自発的なフロック形成機構の更なる解明を行うことと,フロックの人工的な機能化に基づき複合微生物反応場を構築することで,最終的に難培養性微生物の共生培養による取得を目指す.

Outline of Final Research Achievements

In this study, the mechanism of enhanced floc formation of Escherichia coli by polyols was elucidated and floc formation was applied to culture unculturable bacteria. Floc formation was not promoted by increasing the medium viscosity with glycerol addition. However, the addition of ethylene glycol also significantly promoted floc formation. The addition of short-chain polyols decreased the number of viable ΔdegP cells in the floc structure and enhanced outer membrane vesicle (OMV) production by ΔdegP cells; polyols-induced damage to the outer membrane in ΔdegP cells may contribute to the promoted floc formation. As for the culturing of unculturable bacteria, Bacillus licheniformis RK14 or Micrococcus luteus was cocultured with E. coli to function the floc. However, it failed to culture the unculturable bacteria derived from activated sludge using functionalized E. coli flocs. A further trial is required for the culturing of unculturable bacteria.

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

本研究では,ポリオール類の添加が大腸菌の細胞に物理的なダメージを与え,外膜小胞と呼ばれる細胞外小胞の生産促進を介して,フロック形成を促進させることを明らかにした.ポリオールが外膜小胞現象を介してフロック形成に関連することを明らかにしたのは本研究が初めてであり,学術的に意義があるものである.また,難培養性微生物の可培養化は達成できなかったが,複合微生物化によりフロック構造の強化や機能化に成功した.このようなボトムアップアプローチにより,微生物複合系を構築する内容はこれまでに例が少ないことから,微生物が関与する分野・産業への波及効果は大きく,得られた研究成果の社会的意義は大きい.

Report

(4 results)
  • 2021 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2020 Research-status Report
  • 2019 Research-status Report
  • Research Products

    (14 results)

All 2021 2020 2019 Other

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (8 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 1 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] Aberrant membrane structures in hypervesiculating Escherichia coli strain ΔmlaEΔnlpI visualized by electron microscopy2021

    • Author(s)
      Y. Ojima, T. Sawabe, M. Nakagawa, YO. Tahara, M. Miyata, and M. Azuma
    • Journal Title

      Frontiers in Microbiology

      Volume: 12 Pages: 706525-706525

    • DOI

      10.3389/fmicb.2021.706525

    • Related Report
      2021 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] 外膜小胞に着目した大腸菌のタンパク質分泌生産の試み2021

    • Author(s)
      尾島 由紘、 東 雅之
    • Journal Title

      化学工業

      Volume: 72(5) Pages: 319-324

    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Journal Article] 大腸菌の外膜小胞高生産株の作製とタンパク質分泌生産等への利用2021

    • Author(s)
      尾島 由紘,東 雅之
    • Journal Title

      酵素工学ニュース

      Volume: 86 Pages: 32-35

    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Journal Article] Enhanced floc formation by degP-deficient Escherichia coli cells in the presence of glycerol2021

    • Author(s)
      Yoshihiro Ojima, Hiroaki Honma, Mio Otsuka, Satsuki Matano, Masayuki Azuma
    • Journal Title

      Journal of Bioscience and Bioengineering

      Volume: 131 Issue: 1 Pages: 33-38

    • DOI

      10.1016/j.jbiosc.2020.09.001

    • NAID

      120007189880

    • URL

      https://ocu-omu.repo.nii.ac.jp/records/2019953

    • Related Report
      2020 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Aberrant membrane structures in hypervesiculating Escherichia coli strain ΔmlaEΔnlpI visualized by quick-freeze deep-etch electron microscopy2021

    • Author(s)
      Yoshihiro Ojima, Tomomi Sawabe, Mao Nakagawa, Yuhei O. Tahara, Makoto Miyata, Masayuki Azuma
    • Organizer
      EMBO Biologists Workshop Bacterial membrane vesicles
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 電子顕微鏡により可視化された大腸菌の外膜小胞高生産株ΔmlaEΔnlpIの異常な膜構造2021

    • Author(s)
      尾島由紘,澤邊朋美,中川真緒,田原悠平,宮田真人,東雅之
    • Organizer
      第73回日本生物工学会大会
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] 土壌より単離したBacillus licheniformis RK14株の自発的な凝集体形成2021

    • Author(s)
      俣野沙月,尾島由紘,東雅之
    • Organizer
      第73回日本生物工学会大会
    • Related Report
      2021 Annual Research Report
  • [Presentation] 大腸菌フロックの複合微生物化の検討2020

    • Author(s)
      俣野 沙月、大塚 未音、本間 裕章、尾島 由紘、東 雅之
    • Organizer
      日本生物工学会関西支部 2020年度学生オンライン発表会
    • Related Report
      2020 Research-status Report
  • [Presentation] 大腸菌の外膜小胞高生産株の生産促進機構2020

    • Author(s)
      尾島 由紘、東雅之
    • Organizer
      生物工学Webシンポジウム2020(日本生物工学会)
    • Related Report
      2020 Research-status Report
  • [Presentation] 外膜小胞に誘発される大腸菌フロックのグリセロールによる形成促進機構の解析2019

    • Author(s)
      本間裕章, 尾島由紘, 東雅之
    • Organizer
      膜シンポジウム2019
    • Related Report
      2019 Research-status Report
  • [Presentation] Outer membrane vesicles of Gram-negative bacteria and its application to microbial biotechnology2019

    • Author(s)
      Yoshihiro Ojima, Masayuki Azuma
    • Organizer
      ICGEB-IMBT Workshop2019
    • Related Report
      2019 Research-status Report
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Efficient formation of Escherichia coli flocs by glycerol addition2019

    • Author(s)
      Hiroaki Honma, Mio Otsuka, Yoshihiro Ojima, Masayuki Azuma
    • Organizer
      18th Asian Pacific Confederation of Chemical Engineering Congress (APCChE 2019)
    • Related Report
      2019 Research-status Report
    • Int'l Joint Research
  • [Remarks] 研究者総覧

    • URL

      https://research-soran17.osaka-cu.ac.jp/html/100000485_ja.html

    • Related Report
      2020 Research-status Report
  • [Remarks] 研究室ホームページ

    • URL

      https://www.bioa.eng.osaka-cu.ac.jp/bie/index.html

    • Related Report
      2020 Research-status Report

URL: 

Published: 2019-04-18   Modified: 2023-01-30  

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