| Project/Area Number |
19K08614
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
神尾 孝一郎 日本医科大学, 医学部, 講師 (20465305)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吾妻 安良太 日本医科大学, 医学部, 教授 (10184194)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2021: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
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| Keywords | 特発性肺線維症 / Macrophage polarization / MMP-13 / 制御性Ｔ細胞 / macrophage polarization |
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| Outline of Research at the Start |
本研究は、自家細胞を用いて肺線維症モデルマウスの肺線維化の改善効果を検討し、治療応用へ展開するための研究基盤確立を目的とするものであり、対象とする疾患は呼吸器難病の一つである特発性肺線維症である。
これまでの検討で制御性T細胞がブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスの肺線維化を改善させる事を報告した。この線維化改善メカニズムとマイクロRNAでの制御機構を解明する。また予備的な検討で、マウスより採取した骨髄細胞をサイトカインと培養すると特定のマクロファージが誘導され、同細胞の養子移入による肺線維化の改善が確認された。同細胞の性格の詳細な解析を行い、抗線維化メカニズムを明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、まずサイトカインと培養した骨髄細胞の抗線維化作用を再確認した。これまで確認した通り、骨髄細胞をIL-4で培養した所、ブレオマイシン誘発のマウス肺線維症は有意に抑制された。骨髄細胞をIL-4に加えてTGF-beta1と培養しても同様の結果が得られたが、IL-10との培養では、線維化の抑制効果は認められなかった。
本細胞のphenotypeをRT-PCRを用いて検討した。まずこの細胞はF4/80をマクロファージと同程度に発現していることが確認された。さらにこれらの細胞では、CD86は低下していたが、CD206、Ym-1、Arginase-IといったM2マクロファージのマーカーが増加しており、IL-4ならびにIL-4+TGF-beta 1で分化させた細胞は、M2-like マクロファージ様の細胞である事が示唆された。
これらの細胞を養子移入した後の細胞の分布を調べるために、GFPトランスジェニックマウスの骨髄細胞をIL-4などで分化させ養子移入し、肺内での分布を確認することを試みたが、養子移入後１４日目にsacrificeした肺内では（ブレオマイシン投与後からは２８日目）、GFP陽性細胞は確認することができなかった。さらにこれらの細胞から分泌される可能性のあるMMP-9の関与を免疫染色などで確認を試みたが、MMP-9陽性細胞の関与は確認できなかった。
RT-PCRを用いた検討で、これらの細胞が抗線維化作用を有するMMP-13を高く発現する事が確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
IL-4などで分化させた骨髄細胞は、M2-likeマクロファージである事が確認され、同細胞の抗線維化作用が確認されている。
さらに同細胞がMMP-13を高発現する事が確認されており、MMP-13の抗線維化作用が示唆される。
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| Strategy for Future Research Activity |
尾静脈より養子移入したM2-like マクロファージの生体内での分布を詳細に検討するため、これらの細胞を標識し、IVISを用いた経時的な評価を予定している。
またこれらの細胞の抗線維化作用を確認するため、MMP-13ノックアウトマウスの骨髄細胞を用いて、抗線維化作用の評価を行う。
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