オートファジー基質p62を標的とした新しい悪性中皮腫治療法、診断法の開発

• Project/Area Number: 19K08616
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
• Research Institution: Hyogo Medical University
• Principal Investigator: 篠原 義康 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (60723509)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 辻村 亨 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (20227408) ; 佐藤 鮎子 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (20419823) ; 結城 美智子 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (60467587)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2021-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2020)
• Budget Amount: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000); Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2020: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2019: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
• Keywords: オートファジー / p62 / LC3 / シスプラチン耐性 / 悪性中皮腫 / p62(SQSTM) / 抗がん剤抵抗性 / 細胞増殖

Outline of Research at the Start

悪性中皮腫は予後不良な悪性腫瘍であり、有効な治療法の開発は進んでいない。一方、オートファジーは、細胞内の不具合な構成成分を分解する細胞内浄化機構であり、腫瘍における機能や役割が注目されているが、未だに明らかとなっていない。p62(SQSTM)は、抗癌剤耐性などに関わる多機能なシグナル分子(足場蛋白質)で、オートファジーを介して分解される蛋白質の一つとして知られている。本研究では、悪性中皮腫細胞においてp62に着目してオートファジーの機能や役割を解明し、新規治療法や新規診断法の開発に向けた検討を行う。

Outline of Annual Research Achievements

作製したシスプラチン耐性GFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株（MM16-GFP-LC3-cis-R、MM56-GFP-LC3-cis-R、MSTO-211H-GFP-LC3-cis-R、ACC-Meso4-GFP-LC3-cis-R）とGFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株（MM16-GFP-LC3、MM56-GFP-LC3、MSTO-211H-GFP-LC3、ACC-Meso4-GFP-LC3）のGFP-LC3を観察することで、細胞内のGFP-LC3（オートファゴソーム）を観察した。シスプラチン耐性GFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株とGFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株では、GFP-LC3（オートファゴソーム）の動態に著しい変化はなかった。また、シスプラチン耐性GFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株とGFP-LC3発現悪性中皮腫細胞株のLC3蛋白質とp62蛋白質の発現量はウエスタンブロット法では、差がなかった。ｐ62やオートファジーを抑制すると、細胞の増殖能の低下やシスプラチン抵抗性低下が引き起こされるが、悪性中皮腫細胞の悪性化の形質転換には、関与しない可能性が示唆された。しかし、興味深いことに、上皮細胞様の形態であるMM56-GFP-LC3、ACC-Meso4-GFP-LC3は、シスプラチン耐性（MM56-GFP-LC3-cis-R、ACC-Meso4-GFP-LC3-cis-R）になると紡錘形様の細胞に形態が変化した。癌の悪性化や抗癌剤抵抗性などにおいて、上皮間葉転換（EMT）が関わることが知られている。また、EMTが起こると細胞が上皮系細胞から紡錘形様の間葉系細胞に形態が変化する。今回、作製したシスプラチン抵抗性細胞ではEMTのような現象が起きているものと推測されるが、さらにEMTマーカーなどの解析が必要であると考えられた。