予防歯科におけるチェアサイドPCR法の確率とREDコンプレックス除菌療法の展開

• Project/Area Number: 19K10472
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 57080:Social dentistry-related
• Research Institution: Tsurumi University
• Principal Investigator: 山田 秀則 鶴見大学, 歯学部, 助教 (60240032)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 村田 貴俊 鶴見大学, 歯学部, 講師 (10313529) ; 花田 信弘 鶴見大学, 歯学部, 教授 (70180916) ; 宮之原 真由 鶴見大学, 歯学部, 学部助手 (70460186) ; 野村 義明 鶴見大学, 歯学部, 学内教授 (90350587)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2024-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2023)
• Budget Amount: ¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000); Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2022: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000); Fiscal Year 2021: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000); Fiscal Year 2020: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000); Fiscal Year 2019: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: REDコンプレックス / チェアサイドPCR / 唾液 / 歯周病菌 / チェアサイドPC / Redコンプレックス / 3DS / 歯周病

Outline of Research at the Start

「モバイル遺伝子検査機」を用い、3菌種の歯周病菌（REDコンプレックス）を同時検出するチェアサイドPCR法を確立する。それを臨床応用し、歯面薬剤輸送システム（Dental Drug Delivery System (3DS)）と組み合わせ、チェアサイドPCR法を活用して、歯周病菌除菌のための薬剤を選択あるいは開発し効果的な歯周病菌除菌システムの構築を試みる。

Outline of Annual Research Achievements

口腔に存在する病原性細菌による、う蝕や歯周病などの口腔疾患の発症が密接に関連している。よって口腔内の病原性細菌、特にREDコンプレックスとされているPorphyromonas gingivalis、Treponema denticola、Tannerella forsythiaは、歯周病予防・治療のターゲットとなっている。従来のREDコンプレックスの検出・定量法は歯垢やサンプルを検査会社へ委託する等、結果を得るために時間を要していた。われわれはポータブルで簡便なリアルタイムPCR装置を用いて、菌種特異的プライマーおよび、蛍光プローブを設計し、新たに設計したプローブを用いて、マルチプレックスリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法を開発した。Streptococcus mutansを検出するために、新たに設計したプローブ/プライマーセットを用いて、マルチプレックスリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法を開発した。
Porphyromonas gingivalis、treponema denticola、 tannerella forsythiaを検出する理論上の最小コピー数S. mutans、P. gingivalis、T. denticola、T. forsythiaの理論上の最小コピー数はそれぞれ1、1、4、3であった。PCR法は、ヒト唾液中のS. mutansおよびP. gingivalisのコロニー形成を同時に検出した。標準的な研究室にあるコンベンショナルPCRとリアルタイムPCR装置との測定結果を比較した。その検出するS. mutans、P. gingivalisの検出について遜色ない結果であった。これらの結果はマルチプレックスリアルタイムPCRシステムが口腔疾患のリスク評価に有用であることを示唆している。口腔疾患のリスク評価に有用であることが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Rapid multiplex real-time PCR assay using a portable device for the detection of oral pathogens (2024)
  • Author(s): Wint Wit Yee、Miyanohara Mayu、Yamada Hidenori、Nakatsuka Takako、Okamoto Masaaki、Ryo Koufuchi、Tanaka Tomoko、Hanada Nobuhiro、Murata Takatoshi
  • Journal Title: Diagnostic Microbiology and Infectious Disease Volume: 109 Issue: 1 Pages: 116214-116214
  • DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2024.116214
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Inhibitory effect of black cumin (Nigella sativa) seed essential oil on Fusobacterium nucleatum L-methionine-γ-lyase (L-methioninase) activity (2021)
  • Author(s): Ishikawa Masao、Murata Takatoshi、Okamoto Masaaki、Miyanohara Mayu、Yamashita Mamiko、Hanada Nobuhiro、Senpuku Hidenobu、Shibuya Koji
  • Journal Title: FEMS Microbiology Letters Volume: 368 Issue: 7 Pages: 1-5
  • DOI: 10.1093/femsle/fnab041
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Supplied Food Consistency and Oral Functions of Institutionalized Elderly (2020)
  • Author(s): Nomura Y, Tsutsumi I, Nagasaki M, Tsuda H, Koga F, Kashima N, Uraguchi M, Okada A, Kakuta E, Hanada N.
  • Journal Title: Int J Dent. Volume: 2020 Pages: 3463056-3463056
  • DOI: 10.1155/2020/3463056
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Nutritional Status and Oral Frailty: A Community Based Study (2020)
  • Author(s): Nomura Yoshiaki、Ishii Yoshimasa、Suzuki Shunsuke、Morita Kenji、Suzuki Akira、Suzuki Senichi、Tanabe Joji、Ishiwata Yasuo、Yamakawa Koji、Chiba Yota、Ishikawa Meu、Sogabe Kaoru、Kakuta Erika、Okada Ayako、Otsuka Ryoko、Hanada Nobuhiro
  • Journal Title: Nutrients Volume: 12 Issue: 9 Pages: 2886-2886
  • DOI: 10.3390/nu12092886
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Oral Microbiome of Children Living in an Isolated Area in Myanmar (2020)
  • Author(s): Nomura Y, Otsuka R, Hasegawa R, Hanada N.
  • Journal Title: Int J Environ Res Public Health. Volume: 5;17(11) Issue: 11 Pages: 4033-4033
  • DOI: 10.3390/ijerph17114033
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Purification of a High Molecular Mass Protein in Streptococcus mutans. (2019)
  • Author(s): Murata T , Yamashita M , Ishikawa M , Shibuya K , Hanada N
  • Journal Title: Journal of visualized experiments : JoVE Volume: 151 Issue: 151 Pages: 151-151
  • DOI: 10.3791/59804
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] 菌体外で検出されるStreptococcus mutansコラーゲン結合タンパク(Cnm)複合体(Detection of collagen-binding protein(Cnm) complex in Streptococcus mutans culture supernatant) (2022)
  • Author(s): 村田貴俊
  • Organizer: 第64回歯科基礎医学会学術大会
• [Presentation] 全身的な健康を歯科から考える“予防医学”としての概念を歯科へ「3DS除菌外来」の試み 第八報 (2021)
  • Author(s): 山田秀則,宮之原真由,曽我部薫,岡田彩子,武内博朗,村田貴俊,野村義明,花田信弘.
  • Organizer: 第70回日本口腔衛生学会・総会
• [Presentation] 舌清掃およびTHP 3DS paste llを併用したカンジダの除菌効果 (2021)
  • Author(s): 宮之原真由,村田貴俊,山田秀則,中塚貴子,影島宏紀,岡本公彰,花田信弘.
  • Organizer: 第70回日本口腔衛生学会・総会
• [Presentation] 全身的な健康を歯科から考える“予防医学”としての概念を歯科へ。「3DS除菌外来」の試み 第七報 (2020)
  • Author(s): 山田秀則, 宮之原真由,曽我部薫,岡田彩子,武内博朗,村田貴俊,野村義明,花田信弘
  • Organizer: 第69回日本口腔衛生学会・総会
• [Presentation] 血管内皮機能に対する歯周組織健康状態改善の有効性評価(第3報):ランダム化並行群間比較試験 (2020)
  • Author(s): 岡田彩子,村田貴俊,有吉芽生,大塚良子,山下万美子,小坂美樹,鈴木 恵,赤間ひとみ,植松裕美,今村安芸子,佐藤 勉,マティン カイルール,花田信弘
  • Organizer: 第69回日本口腔衛生学会・総会
• [Presentation] 【腸内フローラとディスバイオーシス(バランス失調)】口腔微生物叢と歯のケアが腸内微生物叢に及ぼす影響 (2019)
  • Author(s): 花田 信弘 , 野村 義明 , 村田 貴俊 , 岡本 公彰
  • Organizer: (公財)ヤクルト・バイオサイエンス研究財団:腸内フローラシンポジウム
  • Int'l Joint Research / Invited