| Project/Area Number |
19K17380
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 52050:Embryonic medicine and pediatrics-related
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
下村 英毅 兵庫医科大学, 医学部, 准教授 (30441273)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 筋ジストロフィー / スプライシングアイソフォーム / 血管内皮増殖因子 / スプライシング異常 / スプライシング |
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| Outline of Research at the Start |
Duchenne 型筋ジストロフィー（DMD）は、ジストロフィンタンパクの異常に発症する進行性の筋萎縮症であり、2010年頃より本疾患に対する新規治療法の治験が全世界で行われている。しかし、明らかな臨床効果を示した治療法は未だ報告されていない。近年、血管内皮増殖因子（VEGF）のスプライシングアイソフォームの一つであるVEGF-A165aが、本疾患の病態を改善する可能性が報告された。この研究では、VEGFのスプライシングを修正し、スプライシングアイソフォームをVEGF-A165a優位にシフトすることで、新規治療を開発することを目的にする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
Duchenne 型筋ジストロフィー（DMD）は、ジストロフィンタンパクの異常に発症する進行性の筋萎縮症であり、2010年頃より本疾患に対する新規治療法の治験が全世界で行われている。近年、血管内皮増殖因子（VEGF）のスプライシングアイソフォームの一つであるVEGF-A165aが、本疾患の病態を改善する可能性が報告された。この研究では、VEGFのスプライシングを修正し、スプライシングアイソフォームをVEGF-A165a優位にシフトすることで、新規治療を開発することを目的にする。2021～2023年度は、過去に筋生検を行ったDuchenne型筋ジストロフィー患者の生検筋、その他の筋疾患症例の生検筋より抽出したRNA、および正常筋由来mRNAを鋳型として、VEGF-Aのスプライシングアイソフォームの発現様式をダイレクトシーケンス法で解析した。現在は昨年度に引き続き、症例の蓄積を行っている。また、蓄積した症例の臨床所見とスプライシングアイソフォームの発現様式を比較している。発現様式の比較にはダイレクトシーケンスによる比較と、RNAシーケンス解析を用いた定量性の比較を検討している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
2019年度はまずヒト正常筋由来mRNAを解析し、VEGF-Aのスプライシングアイソフォームの解析を行った。20220度以降は患者生検筋を用いて症例の蓄積と正常筋由来mRNAとの比較を行う予定であったが、社会環境の悪化により症例の蓄積が想定していたように進んでいない。2024年はさらに症例を蓄積し、mRNAの解析を進めていく。
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| Strategy for Future Research Activity |
前年度に引き続き、Duchenne型筋ジストロフィーを含めた筋疾患由来mRNAの解析と比較を進めていく。さらにrealtime RT (reverse transcription)-PCR法、RNAシーケンス法により定量的に解析する。正常および各病態におけるアイソフォーム様式を検討することにより、VEGF-A165aなどの各アイソフォームの関与を検証する。その結果に基づき、AS-oligoによりスプライシングを制御し、VEGF-A165aなどの病態改善に関与するアイソフォーム優位の発現様式にスプライシングをシフトし得ることを以下のように検証する。VEGF-Aの標的となるエクソンあるいは周辺イントロンの塩基配列に対しinsilico解析を行い、スプライシング促進配列と抑制配列を同定するとともに、対応するAS-oligoの作成を進めていく
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