| Project/Area Number |
19K17945
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 54030:Infectious disease medicine-related
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| Research Institution | Hokkaido University (2023)
National Institute of Infectious Diseases (2019-2022) |
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Principal Investigator |
齊藤 慎二 北海道大学, ワクチン研究開発拠点, 特任講師 (80787200)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2019: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
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| Keywords | 迅速診断法 / モノクローナル抗体 / IgA / 鳥インフルエンザウイルス / 検査法 / ELISA法 / イムノクロマト法 / 抗体 / H9N2 |
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| Outline of Research at the Start |
抗体の親和性が低下したインフルエンザウイルスに対して、抗体の多量体化により活性が補償される現象が明らかになった。抗体の多量体化は定常領域で起こるため、抗原結合部位には依存せず理論上全ての抗体に対して応用可能と考えられる。そこで抗原結合部位に依存しない抗体の結合活性増強法を用いた検査法の開発を目指す。
新たなパンデミックを引き起こすことが危惧されている鳥インフルエンザウイルスA(H9N2)を対象とし、A/H9亜型ウイルスのHAのアミノ酸配列の保存性の高い領域に対するモノクローナル抗体を作製する。また、診断法に応用可能な多量体抗体の作製法を検討する。これらを組み合わせて診断法の開発を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
イムノクロマト法やELISA法は抗原抗体反応を利用した広く使用されている検査系である。これらの方法は基本的に使用する抗体の性質（結合親和性・特異性等）により、検査系の性質が規定される。しかしながらCOVID-19のような新たな感染症発生時に結合親和性の高い抗体を短時間で準備することは難しい。そのため、抗体の結合親和性自体の増強とは別に、多くの感度増強法が開発されている。
申請者が開発した「抗体の抗原結合部位に依存しない抗体の活性増強法」はヒトのIgA抗体で多量体を作製する技術である。この方法は抗体の抗原結合部位に依存せず抗体の活性を増強することができる、また他の感度増強法である蛍光検出法などと組み合わせることで相加的に感度の増強を行うことも理論上可能である。
多くの既存の抗原抗体反応を利用した検査法はIgG抗体を利用しているので、シームレスに既存検査法に導入できるようにするため、ヒトのIgA抗体の多量体化技術を用いてIgG抗体を多量体化する方法の検討を行った。
同一抗体クローンでマウスIgG（mIgG）、2022年度に作製したマウスIgGとヒトIgA2のキメラコンストラクト（mIgGhA2）の単量体と多量体の3種類の組換え抗体を作製した。それらの抗体とA/Narita/1/2009 (H1N1pdm09)由来の組換えHA を用いてELISA法により増強効果を検討した。同一濃度でのシグナル強度を比較したところ、mIgGhA2の多量体> mIgGhA2の単量体＞mIgGの順であり、ヒトのIgAで認められた現象と同様に、このキメラコンストラクトでも感度増強効果を確認できた。
来年度は感度増強効果のクローン依存性や広域反応性を検討し、結果の普遍性などを確認する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
国立感染症研究所の職員という職務上、2019年末に発生した新型コロナウイルス対策に従事する必要が生じた。2023年度は研究を実施できる時間が改善されつつあり、過去に企図していた実験をいくつか実施した。しかし昨年度は感染研職員の任期が満了するにあたり、新たな研究先を探す事などに時間を取られてしまい、研究に遅れを生じてしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は2022年度までに検討したマウスIgGとヒトIgA2のキメラコンストラクトを使用して、実際にELISA系を構築し、多量体化による検出系の感度増強効果を検討した。
来年度は感度増強効果のクローン依存性や広域反応性を検討し、結果の普遍性などを確認する予定である。得られた実験の結果の論文化も進め、社会へ知識の還元を実施したい。
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