| Project/Area Number |
19K18586
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 56030:Urology-related
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
関野 陽平 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (30837810)
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| Project Period (FY) |
2022-12-19 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2020: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
Fiscal Year 2019: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
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| Keywords | 前立腺がん / オルガノイド / 転写超保存領域 / 前立腺癌 / 癌幹細胞 |
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| Outline of Research at the Start |
前立腺癌オルガノイドを用いて、癌幹細胞特異的T-UCRを同定し、前立腺癌における発現解析および生物学的機能解析を行う。［1］前立腺癌オルガノイドの樹立［2］癌幹細胞特異的T-UCRの同定［3］同定したT-UCRの発現・機能解析 ① 発現解析 ② 幹細胞性の解析 ③ micro RNAとのinteraction ④ 薬剤感受性との関連 ⑤ 関連する遺伝子の網羅的解析
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| Outline of Annual Research Achievements |
前立腺癌からオルガノイドの樹立に成功し、樹立したオルガノイドを使用してRNAシークエンスを行い、転写超保存領域のUC.3+、UC.4+の発現が上昇していることを同定した。前立腺癌30サンプル、非癌部の10サンプルでUC3+、UC4+の発現解析を行うと前立腺癌で有意に上昇していた。前立腺癌細胞株（LNCaP, C4-2）を用いてUC.3+、UC.4+の強制発現株を作成した。また前立腺細胞株PC3に対してsiRNAを用いてノックダウンを行った。それぞれリアルタイムPCRでUC.3+、UC.4+の発現の亢進、減少を確認した。Uc4+の強制発現株で細胞増殖アッセイを行うと、コントロールと比較して細胞増殖が亢進した。また細胞遊走アッセイにおいてはコントロールと比較して遊走能が亢進した。Uc3+の強制発現株で細胞増殖アッセイを行うと、コントロールと比較して細胞増殖が亢進した。また細胞遊走アッセイにおいてはコントロールと比較して遊走能が亢進した。UC4+の増殖能、遊走能の亢進のメカニズムの解析目的に強制発現株を用いてＲＮＡシークエンスを行ったところ、TGFβシグナリングが亢進していた。western blottingでリン酸化SMAD3の発現が亢進し、EMTマーカーもNカドヘリンの亢進、Eカドヘリンの減弱を認めた。UC4+の増殖能、遊走能の亢進のメカニズムの解析目的に強制発現株を用いてＲＮＡシークエンスを行ったところ、MAPKのシグナリングの亢進を認め、western blottingでリン酸化AKTの亢進を認めた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
前立腺癌オルガノイドの樹立に難渋したため、オルガノイド特異的な転写超保存領域の同定といった以降の研究にすすめなかった。また研究機関に海外留学となり、研究を中断したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
細胞株で得られた結果をマウスモデルで実証していく予定である。
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