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Elucidation of the molecular basis of the ultra-early stage of endocytosis by high-resolution observation of cell membrane dynamics

Research Project

Project/Area Number 19K22506
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)

Allocation TypeMulti-year Fund
Review Section Medium-sized Section 48:Biomedical structure and function and related fields
Research InstitutionHokkaido University

Principal Investigator

Ohba Yusuke  北海道大学, 医学研究院, 教授 (30333503)

Project Period (FY) 2019-06-28 – 2021-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2020)
Budget Amount *help
¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2020: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Fiscal Year 2019: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Keywords細胞膜 / 高速分子間力顕微鏡 / 薄層遮光照明法 / 相関イメージング / correlative imaging / 高速原子間力顕微鏡 / 薄層 斜光照明法
Outline of Research at the Start

細胞膜の形態と成分のダイナミックな変化は、細胞が周囲環境変化に応答した物質の取り込みやシグナル伝達を発動するために重要である。本研究では、(1) 高速原子間力顕微鏡による細胞膜微細構造の物理的高分解能計測と、(2) 薄層斜光照明法と蛍光異方性を用いた細胞膜形態の回折限界を超えた光学的計測 とを同時に行う。この世界でオンリーワンの高分解能計測法を用いたバイオイメージングにより、エンドサイトーシスを効率的に行うために予めプログラムされたドメインを解析し、細胞膜形態変化の分子基盤の解明および「細胞膜動態学の創出」を目指す。

Outline of Final Research Achievements

In this study, we utilized correlative imaging by hybrid microscopy combined with live-cell high-speed atomic force microscopy and fluorescence microscopy to observe and analyze the dynamics of cell membranes and molecules associated with clathrin-dependent endocytosis. We found that clathrin-coated pit formation induced by growth factor stimulation appears in a certain localized region of the plasma membrane and the morphology of the pit is not limited to circular (spherical), but can also be elliptical and divisive. Wey also found that Src is involved in such phenomena.

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

細胞内と細胞外環境を隔てる脂質二重膜であると同時に、細胞内外のコミュニケーションを司るインターフェースである細胞膜の3次元的なダイナミクスに関する知見はこれまで限られていた。本研究では、これまでの動態観察の分解能を10倍向上した高速AFMを用いることで、細胞と組織の活動や運命の決定に重要な細胞外からの刺激に応じた細胞膜の形態と成分の動的変化の解析を可能とし、かつその分子メカニズムの一端を明らかにした。

Report

(3 results)
  • 2020 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2019 Research-status Report
  • Research Products

    (22 results)

All 2020 2019 Other

All Int'l Joint Research (1 results) Journal Article (5 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 5 results) Presentation (16 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 3 results)

  • [Int'l Joint Research] Marine Biological Laboratory(米国)

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      2020 Annual Research Report
  • [Journal Article] Calcium Wave Promotes Cell Extrusion2020

    • Author(s)
      Takeuchi Y、Narumi R、Akiyama R、Vitiello E、Shirai T、Tanimura N、Kuromiya K、Ishikawa S、Kajita M、Tada M、Haraoka Y、Akieda Y、 Ishitani T、Fujioka Y、Ohba Y、Yamada S、Hosokawa Y、Toyama Y、Matsui T、Fujita Y
    • Journal Title

      Current Biology

      Volume: 30 Issue: 4 Pages: 670-681.e6

    • DOI

      10.1016/j.cub.2019.11.089

    • NAID

      120006960639

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Localization of BCR-ABL to Stress Granules Contributes to Its Oncogenic Function2019

    • Author(s)
      Sayaka Kashiwagi, Yoichiro Fujioka, Takeshi Kondo, Aya O. Satoh, Aiko Yoshida, Mari Fujioka, Hitoshi Sasajima, Maho Amano, Takanori Teshima, Yusuke Ohba
    • Journal Title

      Cell Structure and Function

      Volume: 44 Issue: 2 Pages: 195-204

    • DOI

      10.1247/csf.19033

    • NAID

      130007775561

    • ISSN
      0386-7196, 1347-3700
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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Folding Latency of Fluorescent Proteins Affects the Mitochondrial Localization of Fusion Proteins2019

    • Author(s)
      Sayaka Kashiwagi, Yoichiro Fujioka, Aya O. Satoh, Aiko Yoshida, Mari Fujioka, Prabha Nepal, Atsushi Tsuzuki, Ozora Aoki, Sarad Paudel, Hitoshi Sasajima, Yusuke Ohba
    • Journal Title

      Cell Structure and Function

      Volume: 44 Issue: 2 Pages: 183-194

    • DOI

      10.1247/csf.19028

    • NAID

      130007775556

    • ISSN
      0386-7196, 1347-3700
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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Development of immortalized human tumor endothelial cells from renal cancer2019

    • Author(s)
      Nako Maishi, Hiroshi Kikuchi, Masumi Sato, Hiroko Nagao-Kitamoto, Dorcas A. Annan, Shogo Baba, Takayuki Hojo, Misa Yanagiya, Yusuke Ohba, Genichiro Ishii, Kenkichi Masutomi, Nobuo Shinohara, Yasuhiro Hida, Kyoko Hida
    • Journal Title

      Int J Mol Sci

      Volume: 20 Issue: 18 Pages: 4595-4595

    • DOI

      10.3390/ijms20184595

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Clinical efficacy and safety of first-line nilotinib therapy and evaluation of the clinical utility of the FRET-based drug sensitivity test.2019

    • Author(s)
      Kondo T, Fujioka M, Fujisawa S, Sato K, Tsuda M, Miyagishima T, Mori A, Iwasaki H, Kakinoki Y, Yamamoto S, Haseyama Y, Ando S, Shindo M, Ota S, Nishio M, Kurosawa M, Ohba Y, Teshima T, on behalf of the North Japan Hematology Study Group (NJHSG).
    • Journal Title

      International Journal of Hematology

      Volume: 110 Issue: 4 Pages: 482-489

    • DOI

      10.1007/s12185-019-02696-w

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  • [Presentation] ミトコンドリア-エンドソーム間相互作用によるエンドソーム成熟化促進機構2020

    • Author(s)
      佐藤絢、藤岡容一朗、大場雄介
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      第72回日本細胞生物学会大会
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  • [Presentation] インフルエンザウイルスの宿主細胞における感染成立機構の解析2020

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      藤岡容一朗,佐藤絢,吉田藍子,天野麻穂,皆川慶嘉,田端和仁,野地博行,大場雄介
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      第72回日本細胞生物学会大会
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  • [Presentation] 蛍光タンパク質の成熟促進化はミトコンドリアマーカー本来の局在を阻害する2020

    • Author(s)
      柏木 彩花、藤岡 容一朗、佐藤 絢、吉田 藍子、藤岡 真理、Nepal Prabha、続木 惇、 青木 大空、Paudel Sarad、笹島 仁、大場 雄介
    • Organizer
      第97回日本生理学会大会
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  • [Presentation] Live-cell imaging and analysis of the plasma membrane dynamics during clathrin-mediated endocytosis by high-speed atomic force microscopy2019

    • Author(s)
      A. Yoshida A、N . Sakai、N . Takahashi、S . H . Yoshimura、 Y . Ohba
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      ASCB|EMBO 2019
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    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Functional Analysis of Mitochondria-endosome Interaction in the Regulation of Endocytosis2019

    • Author(s)
      A. O. Satoh、Y .Fujioka、H. Sasajima、S . Paudel、A . Nanbo、Y . Ohba
    • Organizer
      ASCB|EMBO 2019
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    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Irs4 Mediates Egf-dependentUpregulation of Endocytosis through the Recruitment of Ras-pi3k Complex to the Endosome.2019

    • Author(s)
      M . Amano、Y. Fujioka、A . O . Satoh、K. Horiuchi、A . Yoshida、H. Sasajima、C . Obuse、 Y. Ohba
    • Organizer
      ASCB|EMBO 2019
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      2019 Research-status Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] インフルエンザウイルス粒子の細胞取り込み機構の解析2019

    • Author(s)
      藤岡 容一朗、佐藤 絢、吉田 藍子、笹島 仁、Sarad Paudel、皆川 慶嘉、田端 和仁、野地 博行、大場 雄介
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] IRS4はRas ‐ PI3K複合体のエンドソーム局在化を介して依存性エンドサイトーシスを制御する2019

    • Author(s)
      天野 麻穂、藤岡 容一朗、佐藤 絢、堀内 浩水、吉田 藍子、笹島 仁、小布施 力史、大場 雄介
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
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      2019 Research-status Report
  • [Presentation] Probing in vivo dynamics of plasma membrane during clathrin-mediated endocytosis2019

    • Author(s)
      Aiko Yoshida、Nobuaki Sakai、Naoki Takahashi、Shige H. Yoshimura、Yusuke Ohba
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] 電位依存性Ca2+チャネルはシアル酸化依存的にA型インフルエンザヘマグルチニンと結合し宿主細胞へのウイルス粒子の取り込みを制御する2019

    • Author(s)
      大場雄介
    • Organizer
      第92回日本生化学会学会
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      2019 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] クラスリン依存性エンドサイトーシスに伴う細胞膜動態のライブセル可視化解析2019

    • Author(s)
      吉田藍子、大場雄介
    • Organizer
      第92回日本生化学会学会
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    • Invited
  • [Presentation] 細胞膜動態のcorrelative imaging2019

    • Author(s)
      大場雄介
    • Organizer
      第57回日本生物物理学会年会
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    • Invited
  • [Presentation] 高速原子間力顕微鏡によるエンドサイトーシスに伴う細胞膜の形状変化の ライブセルイメージング2019

    • Author(s)
      吉田 藍子、酒井 信明、 高橋 直希、吉村 成弘、 大場 雄介
    • Organizer
      第71回日本細胞生物学会
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  • [Presentation] ミトコンドリアポアタンパク質を介したミトコンドリア _ エンドソーム間 相互作用によるエンドサイトーシス制御機構2019

    • Author(s)
      佐藤 絢、藤岡 容一朗、笹島 仁、 南保 明日香、大場 雄介
    • Organizer
      第71回日本細胞生物学会
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  • [Presentation] 蛍光タンパク質の成熟促進化はオルガネラマーカー本来の局在を阻害する2019

    • Author(s)
      柏木 彩花、藤岡 容一朗、 笹島 仁、大場 雄介
    • Organizer
      第71回日本細胞生物学会
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  • [Presentation] Ras-PI3Kシグナルによるエンドサイトーシスの制御機構2019

    • Author(s)
      大場雄介
    • Organizer
      第71回日本細胞生物学会
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      2019 Research-status Report

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Published: 2019-07-04   Modified: 2022-01-27  

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