| Project/Area Number |
19KK0199
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| Research Category |
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Medium-sized Section 48:Biomedical structure and function and related fields
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
横溝 岳彦 順天堂大学, 大学院医学研究科, 教授 (60302840)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
城 愛理 (渡辺愛理) 順天堂大学, 大学院医学研究科, 助教 (40726197)
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| Project Period (FY) |
2019-10-07 – 2023-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2021)
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| Budget Amount *help |
¥18,460,000 (Direct Cost: ¥14,200,000、Indirect Cost: ¥4,260,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,200,000 (Direct Cost: ¥4,000,000、Indirect Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2021: ¥5,720,000 (Direct Cost: ¥4,400,000、Indirect Cost: ¥1,320,000)
Fiscal Year 2020: ¥5,460,000 (Direct Cost: ¥4,200,000、Indirect Cost: ¥1,260,000)
Fiscal Year 2019: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
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| Keywords | Gタンパク質共役型受容体 / 生理活性脂質 / 創傷治癒 / 炎症性腸疾患 / GPCR / 作働薬 |
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| Outline of Research at the Start |
BLT2の結晶構造解析と、構造を元にしたBLT2作働薬のリード化合物の樹立を行う。研究代表者の研究室ではBLT2の熱安定変異体の作製と結晶化に必要な単クローン抗体の樹立を行う。Heptares社では、研究代表者が樹立した熱安定変異体BLT2の大量発現、精製、結晶化と構造解析を行い、立体構造を元に候補化合物を選定する。研究代表者は候補化合物の評価を行い、Heptares社にフィードバックする。Heptares社は化合物の至適化を行い、至適化化合物を用いて再度BLT2の結晶化と構造解析を行う。こうしたフィードバックを伴った密接な共同研究によって、BLT2の高親和性作働薬のリード化合物を見いだす。
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| Outline of Annual Research Achievements |
1)BLT2作動薬のスクリーニング 腸内細菌が産生するとされている中鎖、分枝鎖酸化脂肪酸40種を入手し、BLT2に対する作働活性をスクリーニングした。2つの化合物にBLT2作働活性を見いだしたが、濃度依存性を検討したところ、既存のBLT2作働薬CAY10583よりも一桁以上高い濃度を必要とすることが明らかとなった。今後、脂肪酸鎖長、水酸基の位置、分枝鎖の構造などを変化させてBLT2作働活性の高い化合物への変換を試みる。
2)BLT2大量発現系の構築 COVID-19のまん延のため、英国Sosei-Heptares社での研究を行うことができず、BLT2大量発現系の構築における進展は得られなかった。2022年5月に大学院生をSosei-Heptares社に半年間派遣し、遅れているBLT2大量発現系の構築を目指したい。そのために、2021年度の研究費の一部を2022年度に繰り越した。
3)BLT2作働薬の標的疾患の対策 英国Sosei-Heptares社の研究チームと、月に一回の定期的なオンライン会議を行い、BLT2作働薬が有効と考えられるヒト疾患の同定を目指している。具体的には、ヒト炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎、クローン病)の患者検体を用いたRNASeq解析の結果や、抗BLT2抗体を用いたヒト検体の免疫染色のデータを共有している。また、順天堂大学で作成したBLT2過剰発現マウス、BLT2欠損マウスにデキストラン硫酸(DSS)含有水を摂取させることでDSS大腸炎を惹起させ、そのマウス大腸組織を英国Sosei-Heptares社に送付して免疫染色を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
COVID-19まん延のため、共同研究先である英国Sosei-Heptare社においてBLT2大量発現系の構築を行うことができていないため。幸い、英国への入国制限が撤廃されたため、2022年5月に大学院生一名を英国Sosei-Heptare社に派遣し、BLT2大量発現系の構築を行う予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
Heptares社から提供された化合物ライブラリーからは高い活性を有する化合物を見いだすことができなかった。また、腸内細菌が産生すると考えられている酸化脂肪酸ライブラリーを入手し、BLT2作働活性を検討したが、現段階では高活性の化合物は得られていない。現在得ている低活性化合物を基本に構造機能相関をあきらかにし、より高活性の化合物の合成を行いたい。また、微生物学研究所清水孝雄博士より、微生物、真菌、細菌から抽出されたユニークな生体分子ライブラリを用いたGPCR作働薬・拮抗薬のスクリーニング研究の提案を頂いたので、BLT2も標的分子の一つに加えて、BLT2作働薬のリード分子を見いだしたいと考えている。一方で、COVID-19まん延のせいで遅れているBLT2の過剰発現系を構築する。熱安定性をもたらすと考えられるアミノ酸変異導入を行い、大量発現用のBLT2発現ベクターを作成済みである。これをSf9細胞に感染させてBLT2大量発現の培養条件を探索する。2022年4月の段階で渡英が可能になっているため、2022年5月に博士大学院生一名を半年間Sosei-Heptares社に派遣し、変異BLT2の発現と精製を行うことを計画している。
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