バクテリオファージMuを構成するサブユニットの構造解析

• Project/Area Number: 20051004
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 武田 茂樹 Gunma University, 大学院・工学研究科, 教授 (80282854)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥6,600,000 (Direct Cost: ¥6,600,000); Fiscal Year 2009: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2008: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
• Keywords: 蛋白質超分子 / Muファージ / ベースプレート / 自己組織化 / バクテリオファージ / 分子間相互作用 / 分子集合 / 感染

Research Abstract

Muファージの尾部基盤の分子集合・自己組織化による自律的な形態形成の過程を解明するために、基盤を構成するgp41、gp45、gp46の組み換え体蛋白質の精製と解析を行った。それぞれの蛋白質は効率よく大腸菌で発現し、容易に精製することができた。gp46は発現時に沈殿してしまう画分も見られたが、その沈殿を懸濁し500気圧で8時間放置することにより、容易に可溶化できることがわかった。
それぞれの蛋白質のX線結晶解析のための結晶化を試みたが、よい結晶は得られなかった。そこでMuファージgp45とアミノ酸配列で相同性をもち、機能が同じと考えられているP2ファージのgpVについてそのC端ドメインの発現と結晶化を行ったところ、よい回折を示す結晶が得られた。その格子定数はa=71.0Å、b=67.4Å、c=72.1 α=90°Å、β=99.8°、γ=90°であった。回折像はおよそ2.1オングストロームの分解能を示した。現在、同型重原子置換体の作製を行っている。

Research Products

• [Journal Article] The N-terminal domain of GPR61, an orphan G protein-coupled receptor, is essential for its constitutive activity (2009)
  • Author(s): M.Toyooka, et al.
  • Journal Title: J.Neurosci.Res. 87 Pages: 1329-1333
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Production and characterization of the recombinant human μ-opioid receptor from transgenic silkworms (2009)
  • Author(s): M.Tateno, et al.
  • Journal Title: J.Biochem.(Tokyo) 145 Pages: 37-42
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Efficient Silkworm Expression of Human GPCR(Nociceptin Receptor)by a Bombyx mori Bacmid DNA System (2009)
  • Author(s): M.Kajikawa, et al.
  • Journal Title: Biochem.Biophys.Res.Commun.Biochem. 386 Pages: 375-379
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Observation of the membrane binding activity and domain structure of gpV, which comprises the tail spike of bacteriophage P2 (2009)
  • Author(s): Y.Kageyama, et al.
  • Journal Title: Biochemistry 48 Pages: 10129-10135
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Morphine is an exogenous ligand for MrgX2, a G proteincoupled rec eptor for cortistatin (2008)
  • Author(s): Akuzawa N., et.al.
  • Journal Title: J. Cell Animal Biol. 2 Pages: 4-9
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of novel peptide agonists from a random peptide library for a 5oxo-ETE receptor, a receptor for bioactive lipids (2008)
  • Author(s): Sasaki Y., et.al.
  • Journal Title: J. Peptide Sci. 14 Pages: 1251-125
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Production and characterization of the recombinant human μ-opioid receptor from transgenic silkworms (2008)
  • Author(s): Tateno M., et.al.
  • Journal Title: J. Biochem. (Tokyo) 145 Pages: 37-42
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Nterminal domain of GPR61, an orphan G proteincoupled receptor, is essential for its constitutive activity (2008)
  • Author(s): Toyooka M., et.al.
  • Journal Title: J. Neurosci. Res. 87 Pages: 1329-1333
  • Peer Reviewed
• [Presentation] G protein-coupled receptors and insulin secretion ; Drug screening for type 2 diabetes (2010)
  • Author(s): 武田茂樹
  • Organizer: 国際内分泌学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2010-03-30
• [Presentation] 糸状菌培養液からのGタンパク質共役受容体のリガンド検索 (2008)
  • Author(s): 遠山和也他
  • Organizer: 日本生化学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] 糸状菌培養液からの機能不明G蛋白質共役受容体(GPCR)の新規リガンド検索 (2008)
  • Author(s): 遠山和也他
  • Organizer: 日本生化学会年会関東支部例会
  • Place of Presentation: 群馬
  • Year and Date: 2008-06-21
• [Book] 4u(フオーユー) (2009)
  • Author(s): 武田茂樹
  • Total Pages: 2
  • Publisher: 首都圏北部4大学連合
• [Remarks]
  • URL: http://takedalab.bce.gunma-u.ac.jp
• [Remarks]
  • URL: http://takedalab.bce.gunma-u.ac.jp
• [Patent(Industrial Property Rights)] GPR119アゴニスト (2009)
  • Inventor(s): 武田茂樹他
  • Industrial Property Rights Holder: 群馬大学
  • Industrial Property Number: 2009-034072
  • Filing Date: 2009-02-17