無細胞翻訳系を応用した植物膜輸送体の機能解析

• Project/Area Number: 20053016
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 戸澤 譲 Ehime University, 無細胞生命科学工学研究センター, 教授 (90363267)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥4,400,000 (Direct Cost: ¥4,400,000); Fiscal Year 2009: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000); Fiscal Year 2008: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
• Keywords: 無細胞翻訳 / タンパク質 / 生体分子 / 脂質 / 植物

Research Abstract

膜輸送タンパク質は、膜貫通領域が疎水性に富むアミノ酸残基で構成されているという性質を有するため、水溶性のタンパク質と異なり、機能を保持した形での組み換えタンパク質調製が著しく困難である。本課題では、従来の組み換えタンパク質調製法の欠点を補う新規技術として我々が開発したコムギ無細胞翻訳系を利用する試験管内での膜輸送タンパク質の可溶化合成系を、様々な植物膜輸送タンパク質の機能構造解析に応用することを目的として研究を進めている。今年度は、まず無細胞翻訳系でアミノ末端を均一化する新たな技術の構築を進め、学会報告とともに論文発表を行った。7回膜貫通領域を有するモデル膜タンパク質バクテリオロドプシンのプロテオミセル合成の技術開発に成功した。さらに、膜輸送タンパク質のリン酸化などに関与するミリストイル化タンパク質の機能解析システム確立も完了した。これらの研究成果は、和文総説および学会において報告し、原著論文として投稿中である。

Research Products

• [Journal Article] Production of membrane proteins through the what-germ cell-free technology. (2010)
  • Author(s): 野澤彰, 七宮英晃, 戸澤譲
  • Journal Title: Methods in Molecular Biology 607 Pages: 213218-213218
• [Journal Article] Control of translational initiation in the wheat-embryo cell-free protein exporession system for producing homogenenous products. (2010)
  • Author(s): 太田史, 松岡宏樹, 野村勇太, 戸澤譲
  • Journal Title: Protein Expression and Purification On-line
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] コムギ胚芽無細胞系を用いた膜タンパク質生産 (2009)
  • Author(s): 野澤彰, 戸澤譲, 澤崎達也, 遠藤弥重太
  • Journal Title: 蛋白質核酸酵素 54 Pages: 14431447-14431447
• [Journal Article] 無細胞翻訳系を利用した膜タンパク質の機能解析 (2009)
  • Author(s): 戸澤譲, 野澤彰, 源治尚久
  • Journal Title: 化学と生物 47 Pages: 98-103
  • NAID: 10026434746
• [Presentation] コムギ胚芽無細胞翻訳系による機能型シトクロムP450ならびにシトクロムP450還元酵素の合成 (2010)
  • Author(s): 源治尚久, 西山泰孝, 山内清司, 戸澤譲
  • Organizer: 日本農芸化学会2010年度大会
  • Place of Presentation: 東京大学駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 無細胞翻訳系における翻訳促進配列の開始Met-tRNAのコドン認識に与える影響 (2010)
  • Author(s): 太田史, 松岡宏樹, 野村勇太, 源治尚久, 戸澤譲
  • Organizer: 日本農芸化学会2010年度大会
  • Place of Presentation: 東京大学駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-28
• [Presentation] コムギ無細胞翻訳系を用いたタンパク質ミリストイル化修飾の配列特異性の解析 (2010)
  • Author(s): 山内清司, 林秀則, 戸澤譲
  • Organizer: 第51回日本植物生理学会年会
  • Place of Presentation: 熊本大学
  • Year and Date: 2010-03-20
• [Presentation] コムギ無細胞翻訳系を利用した植物タンパク質のミリストイル化機構解明 (2009)
  • Author(s): 戸澤譲, 山内清司, 魚住信之, 林秀則, 遠藤弥重太
  • Organizer: 日本農芸化学会2009年度大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場
  • Year and Date: 2009-03-28
• [Presentation] コムギ無細胞翻訳系を利用したタンパク質ミリストイル化システムの構築 (2009)
  • Author(s): 山内清司, 魚住信之, 林秀則, 遠藤弥重太, 戸澤譲
  • Organizer: 第50回日本植物生理学会年会
  • Place of Presentation: 名古屋大学
  • Year and Date: 2009-03-24
• [Presentation] 異種発現系を用いたコムギALMT1タンパク質の精製 (2009)
  • Author(s): 佐々木孝行, 古市卓也, 源治尚久, 戸澤譲, 山本洋子
  • Organizer: 第50回日本植物生理学会年会
  • Place of Presentation: 名古屋大学
  • Year and Date: 2009-03-22