味覚形成における脂質ミクロドメインの役割

• Project/Area Number: 20056002
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 若森 実 Tohoku University, 大学院・歯学研究科, 教授 (50222401)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥5,400,000 (Direct Cost: ¥5,400,000); Fiscal Year 2009: ¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000); Fiscal Year 2008: ¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000)
• Keywords: TRPM5 / チャネル / パッチクランプ法 / 外向き整流性 / カルシウム / HEK293細胞 / アラキドン酸 / 味蕾

Research Abstract

味蕾に発現するTRPM5チャネルをHEK293細胞に発現させ、アラキドン酸によるTRPM5チャネルの修飾をパッチクランプ法ホールセル法を用いて電気生理学的に検討した。膜電位は-60mVに保持し、3秒毎に80mVから-80mVへの320msのNegative rampをかけることで、電流-電圧関係を記録した。電極内液のフリーCa^<2+>濃度を0.3μMに設定しているため、ホールセル法を確立後に細胞内のCa^<2+>濃度が0.3μMに近づき、徐々にチャネルが活性化され外向き整流性のあるTRPC5チャネル活性が記録できた。細胞外のCa^<2+>を除去すると、チャネル活性が著しく低下した。また、昨年報告した10μMのアラキドン酸で惹起されるチャネル活性も著しく低下した。これは細胞膜に非選択的なリーク電流が存在し、細胞内にCa^<2+>を流入させることによりTRPM5チャネルが活性化された可能性を示唆する。従って、細胞外Ca^<2+>を除去した外液中でアラキドン酸を投与し、脂肪酸のTRPM5チャネルの修飾様式を検討し直した。アラキドン酸は外向き整流性を示し、逆転電位が8mV付近のTRPM5チャネル活性を惹起した。更に、食物中の不飽和脂肪酸でも小さいながらTRPM5チャネルを活性化できることが判明した。しかし、不飽和脂肪酸による修飾は細胞内Ca^<2+>濃度がマイクロモル以下になると認められないことから、不飽和脂肪酸はTRPM5チャネル活性を修飾するにすぎない。

Research Products

• [Journal Article] A pathogenic C terminus-truncated polycystin-2 mutant enhances receptor-activated Ca^<2+> entry via association with TRPC3 and TRPC7 (2009)
  • Author(s): Miyagi K, Kiyonaka S, Yamada K, Miki T, Mori E, Kato K, Numata T, Sawaguchi Y, Numaga T, Kimura T, Kauai Y, Kawano M, Wakamori M, Nomura H, Koni I, Yamagishi M, Mori Y.
  • Journal Title: J Biol Chem 284 Pages: 34400-34412
  • NAID: 120006334914
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Knockdown of Cav2.1 calcium channels is sufficient to induce neurological disorders observed in natural occurring Cacnala mutants in mice (2009)
  • Author(s): Saito H, Okada M, Miki T, Wakamori M, Futatsugi A, Mori Y, Mikoshiba K, Suzuki N.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 390 Pages: 1029-1033
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Selective and direct inhibition of TRPC 3 channels underlies biological activities of a pyrazole compound (2009)
  • Author(s): Kiyonaka S, Kato K, Nishida M, Mio K, Numaga T, Sawaguchi Y, Yoshida T, W akamori M, Mori E, Numata T, Ishii M, Takemoto H, Ojida A, Watanabe K, Ue mura A, Kurose H, Morii T, Kobayashi T, Sato Y, Sato C, Hamachi I, Mori Y
  • Journal Title: Proc Natl Acad Sci USA 106 Pages: 5400-5405
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Two novel alleles of tottering with distinct Ca(v)2.1 calcium channel neuropathologies (2008)
  • Author(s): Miki T, Kiyonaka S, Uriu Y, De Waard M, Wakamori M, Beadle AM, Campbell KR Mori Y
  • Journal Title: Neuroscience 155 Pages: 31-44
  • Peer Reviewed
• [Presentation] TRPM5チャネルの脂肪酸による修飾 (2010)
  • Author(s): 若森実、吉田卓史、菊地尚
  • Organizer: 日本薬理学会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2010-03-17
• [Presentation] 神経や口腔内組織に発現する細胞外環境センサーとしてのTRPチャネル (2009)
  • Author(s): 若森実
  • Organizer: 歯科基礎医学会
  • Place of Presentation: 新潟
  • Year and Date: 2009-09-09
• [Presentation] FACILITATION OF TRPC5 CHANNEL BY CALCIUM (2009)
  • Author(s): Wakamori M, Yoshida T, Yamamoto S, Mori Y
  • Organizer: 国際生理学会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2009-07-30
• [Presentation] Inactivation of Voltage-gated Ca^<2+> channels and Cone-Rod Dystrophy CORD7 (2009)
  • Author(s): WakamoriM, UriuXMiki T, kiyonakaS, MoriY
  • Organizer: 弘前国際医学フォーラム
  • Place of Presentation: 弘前
  • Year and Date: 2009-03-27
• [Presentation] Potentiation of TRPC5 channel activity by Ca^<2+> (2009)
  • Author(s): Wakamori M, Yoshida T, Yamamoto S, Mori Y
  • Organizer: 日本薬理学会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2009-03-16
• [Presentation] Transient receptor potential channels and mechanobiology (2009)
  • Author(s): Wakamori M
  • Organizer: The 3^<rd> International Symposium for Interface Oral Health Science
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2009-01-16
• [Presentation] TRPC5チャネルの細胞外陽イオン依存的活性化機構の解析 (2008)
  • Author(s): 若森実, 吉田卓史
  • Organizer: 日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2008-09-27
• [Presentation] 外液カルシウムによるTRPC5チャネルの活性調節の解析 (2008)
  • Author(s): 若森実、吉田卓史
  • Organizer: 歯科基礎医学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-09-25
• [Presentation] 生体機能調節に深く関わる新規陽イオンチャネル (2008)
  • Author(s): 若森実
  • Organizer: 東北大学バイオサイエンスシンポジウム
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2008-05-19
• [Book] Handbook of Neurochemistry and Molecular Neurobiology 3^<rd> Ed (2009)
  • Author(s): Wakamori M, Imoto K
  • Publisher: Voltage-Gated Calcium Channels