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タンパク質分解による複製のライセンス化制御

Research Project

Project/Area Number 20058030
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionUniversity of Hyogo

Principal Investigator

西谷 秀男  University of Hyogo, 大学院・生命理学研究科, 教授 (40253455)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 塩見 泰史  兵庫県立大学, 大学院・生命理学研究科, 助教 (80380567)
Project Period (FY) 2008 – 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥8,000,000 (Direct Cost: ¥8,000,000)
Fiscal Year 2009: ¥4,000,000 (Direct Cost: ¥4,000,000)
Fiscal Year 2008: ¥4,000,000 (Direct Cost: ¥4,000,000)
Keywords細胞周期 / タンパク質 / 分解 / ユビキチン / タンパクー質
Research Abstract

ほ乳動物細胞において、染色体複製のライセンス化因子Cdt1は、再複製を抑制するためS期開始以降はユビキチン化を受け分解される。一方、我々は、Cdt1はM期中期に安定に存在することを見出した。この安定化は、次の細胞周期のためのライセンス化がM期終期からG1期初期に素早く確立するために重要であると考えている。M期では、Cdt1は高度にリン酸化されており、Cdt1のM期における安定化に関わると考え解析を行なった。
Cdt1-FLAGを安定に発現するHeLa細胞を同調して、M期とS期よりCdt1タンパク質を精製した。質量分析によりリン酸化部位の決定を行ない、M期に特異的に見られる、あるいはS期に比べてM期に顕著にリン酸化が起こっていると思われる部位をCdt1タンパク質全体にわたって検出した。しかしながら、ユビキチンリガーゼSCF-SKp2の認識に必要な29番目のT(スレオニン)および31番目のS(セリン)のリン酸化は検出されなかった。また、M期においてサイクリンA-cdkとCdt1の結合が低下していることを考え合わせ、サイクリンA-cdkの結合部位(Cy部位)近傍のリン酸化が、安定化に関与していると予想した。そこで、Cy部位近傍で検出された4カ所のTあるいはSをアラニン(A)に変異させ安定化を調べた。また、リン酸化部位の配列から、Plk1によるリン酸化が予想された。そこで、リン酸化部位のアラニン変異とsiRNAによるPlk1のサイレンシングを組み合わせて解析を行なったところ、Cdt1のM期安定化の低下が見られた。よって、いくつかのキナーゼによるリン酸化が、Cdt1の安定化に関わると結論した。

Report

(2 results)
  • 2009 Annual Research Report
  • 2008 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2009 2008 Other

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (5 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] START-GAP2/DLC2 is localized in focal adhesions via its N-terminal Oregion2009

    • Author(s)
      Kawai K, et al
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun 380

      Pages: 736-741

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] CDKインヒビターp21の分解による細胞周期の制御2009

    • Author(s)
      塩見泰史
    • Journal Title

      生体の科学 60

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Journal Article] Polycomb-group complex 1 acts as an E3 ubiquitin ligase for Geminin to sustain hematopoietic stem cell activity2008

    • Author(s)
      Ohtsubo M, et.al.
    • Journal Title

      Proc Natl Acad Sci 105

      Pages: 10396-10401

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] CDK inhibitor p21 is degraded by a PCNA coupled Cu14-DDB1Cdt2 nathwav rinrinu S nhase and after UV irradiation2008

    • Author(s)
      Nishitani H, et.al.
    • Journal Title

      J Biol. Chem 283

      Pages: 29045-29052

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 複製因子PCNAに依存したユビキチン化システムによる染色体維持機構2009

    • Author(s)
      西谷秀男, 他
    • Organizer
      第32回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-12
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] 紫外線に応答したヒトCul4-DDB1-Cdt2による細胞周期関連因子のユビキチン化と分解機構2009

    • Author(s)
      塩見泰史, 他
    • Organizer
      第32回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] DNA損傷部位へのCul4/DDB1/Cdt2複合体の基質認識サブユニットCdt2の局在化2009

    • Author(s)
      石井健士, 他
    • Organizer
      第32回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] STUDY OF IN VITRO UBIQUITINATION OF HUMAN CDT1 AND P21 BY CUL4-DDB1-CDT2 COMPLEX2009

    • Author(s)
      Yasushi Shiomi
    • Organizer
      EUKARYOTIC DNA REPLICATION AND GENOME MA-NTENANCE
    • Place of Presentation
      Cold Spring Harbor Laboratory, New York
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] 細胞周期進行に依存したひとCdt1ユビキチン化と分解制御機構の解析2008

    • Author(s)
      塩見泰史, 他
    • Organizer
      日本分子生物学会年会日本生化学会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2008-12-09
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.sci.u-hyogo.ac.jp/life/biosig/index-j.html

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.sci.u-hyogo.ac.jp/life/biosig/index-j.html

    • Related Report
      2008 Annual Research Report

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Published: 2008-04-01   Modified: 2018-03-28  

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