EBウイルスのコードする膜蛋白質LMP2Aの腫瘍化機構の解明

Research Project

Project/Area Number	20590466
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Section	一般
Research Field	Virology
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	福田誠東大, 医科学研究所 (10447336)
Project Period (FY)	2008 – 2010
Project Status	Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help	¥3,120,000 (Direct Cost: ¥2,400,000、Indirect Cost: ¥720,000) Fiscal Year 2009: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000) Fiscal Year 2008: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Keywords	EBV / LMP2A / ITAM / Syk / 国際情報交流(アメリカ)
Research Abstract	我々は、以前、EBVの膜タンパク質の一つLMP2Aによる細胞トランスフォーメーション括性の誘導には、細胞内のRas/PI3-K/Aktシグナル伝遠経路の恒常的活性化が重要であるという論文を報告した。そこで、本研究の目的は、そのシグナル伝達活性化モデルの構築と分子メカニズムを明らかにする事である。本年度は、(1)LMP2Aの74番目ど85番目のチロシンを含むITAM(配列)に着目し、LMP2AのITAMとチロシンキナーゼSykとの相互作用によるキナーゼ活性の誘導とトランスフォーメーション活性との関連を解析する事を目的として、以下の結果を得た。 (1)-1.LNP2A及び工TAM変異体(ITAMのチロシンをフェニルアラニンに置換したもの)LNP2A発現レトロベクターを構琴し、LMP2Aまたは一ITAM変異体LMP-2A一発現HSC-39紬胞を樹立した。(1)-2.至適条件下において、LMP2Aは、Aktのリン酸化とソフトアガロースでのコロニー形成能を付与し、ITAM変異体LMP2Aは、Aktのリン酸化を誘導せず、ソフトアガロースでのコロニー形成能が低下した。(1)-3.抗LMP2A抗体と抗Syk抗体で免疫沈降後、LMP2A発現細胞では、LMP2AとSykのチロシンリン酸化が認められたのに対して、ITAM変異体LMP2A発現細胞では、IT'AM変異体LMP2Aのチロシンリン酸化は認められたが、Sykのチロシンリン酸化は認められなかった。(1)'=4,抗チロシンキナーゼ阻害剤とSyk阻害剤により、LMP2AによるAktのリン酸化の抑制とコロニー形成能が低下した。(1)-5.siRNAにより、SykをノックダウンしたLMP2A発現矧胞では、LMP2Aによるコロニー形成能の低下が認められた。以上の結果から、LMP2Aによるトランスフォーメーション活性の誘導には、LMP2AのITAMと宿主細胞側因子Sykとの相互作用によるチロシンリン酸化が重要な事象の一つである事が示唆された。