Aktを介したサーカディアンリズムの制御

• Project/Area Number: 20659014
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Biological pharmacy
• Research Institution: Japanese Foundation For Cancer Research
• Principal Investigator: 藤田 直也 Japanese Foundation For Cancer Research, 癌化学療法センター基礎研究部, 部長 (20280951)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2009: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000); Fiscal Year 2008: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
• Keywords: 癌 / 生体分子 / 体内時計 / 抗がん剤

Research Abstract

Aktによるリン酸化を検討するために、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1のトタンパク質を大腸菌に発現させ、GSTタグ付きリコンビナントタンパク質として精製することに成功した。精製済みAktと試験管内で^<32>P-ATP存在下で反応させることにより、時計遺伝子産物のAktによるリン酸化を確認した。さらに、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1の断片タンパク質発現バクターを作製し、各々大腸菌より精製を行なった。本断片タンパク質を用いることにより、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1は数カ所の部位がAktによりリン酸化されることを見いだした。主要なAkt依存的なリン酸化部位について、その部位周辺のリン酸化ペプチドをマウスに免疫することで、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1のリン酸化特異モノクローナル抗体を作製することに成功した。本抗体を用いることで、細胞内でもAkt依存的に時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1がリン酸化されていることを確認した。各々のリン酸化部位をアラニンに置換した非リン酸化型時計遺伝子を作製し、Per1プロモーターを用いた時計遺伝子産物の転写活性を検討したが、1カ所のみ変異させたものでは弱い転写活性減少しか認められなかった。主要なリン酸化部位を4カ所ほどアラニンに置換することにより、Akt依存的な時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1の転写活性化が顕著に抑制された。よって、Aktは時計遺伝子産物をリン酸化することにより、概日周期の進行に寄与している可能性が示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Modulation of Wnt signaling by the nuclear localization of cellular FLIP-L (2010)
  • Author(s): Ryohei Katayama
  • Journal Title: J.Cell Sci. 123 Pages: 23-28
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Dofequidar fumarate sensitizes cancer stem-like side population cells to chemotherapeutic drugs by inhibiting ABCG2/BCRP-mediated drug export (2009)
  • Author(s): Ryohei Katayama
  • Journal Title: Cancer Sci. 100 Pages: 2060-2068
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] TUSC4/NPRL2, a novel PDK1-interacting protein, inhibits PDK1 tyrosine phosphorylation and its downstream signaling (2008)
  • Author(s): Atsuo Kurata
  • Journal Title: Cancer Sci. 99 Pages: 1827-1834
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] ss 1 integrin/Fak/Src signaling in intestinal epithelial crypt cell survival : integration of complex regulatory mechanisms (2008)
  • Author(s): Veronique Bouchard
  • Journal Title: Apoptosis 13 Pages: 531-542
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pim kinases promote cell cycle progression by phosphorylating and down-regulating p27^<Kip1> at the transcriptional and post-transcriptional levels (2008)
  • Author(s): Daisuke Morishita
  • Journal Title: Cancer Res. 68 Pages: 5076-5085
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tetraspanin family member CD9 inhibits Aggrus/podoplanin-induced platelet aggregation and suppresses pulmonary metastasis (2008)
  • Author(s): Youya Nakazawa
  • Journal Title: Blood 112 Pages: 1730-1739
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Involvement of the lysophosphatidic acid-generating enzyme autotaxin in lymphocyte-endothelial cell interactions (2008)
  • Author(s): Tae Nakasaki
  • Journal Title: Am. J. Pathol. 173 Pages: 1566-1576
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Platelet aggregation in the formation of tumor metastasis (2008)
  • Author(s): Takashi Tsuruo
  • Journal Title: Proc. Jpn. Acad., Ser. B 84 Pages: 189-198
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Freud-1/Akil, a novel PDK1-interacting protein, functions as a scaffold to activate the PDK1/Akt pathway in epidermal growth factor signaling (2008)
  • Author(s): Akito Nakamura
  • Journal Title: Mol. Cell. Biol. 28 Pages: 5996-6009
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Nuclear localization and Wnt signaling modulation by cellular FLIP-L (2010)
  • Author(s): Ryohei Katayama
  • Organizer: 8th AACR/JCA Joint Conference
  • Place of Presentation: ハワイ、USA
  • Year and Date: 2010-02-06
• [Presentation] Dofequidar Fumarate Reverses Multi-drug Resistance in Cancer Cells by inhibiting ABCG/BCRP-mediated Drug Export (2009)
  • Author(s): Ryohei Katayama
  • Organizer: 第68回日本癌学会総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜、横浜
  • Year and Date: 2009-10-03
• [Presentation] Identification of ABCC2 as an ABC transporter expressed on the side population cells in breast cancer cells (2009)
  • Author(s): Sumie Koike
  • Organizer: 第68回日本癌学会総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜、横浜
  • Year and Date: 2009-10-02
• [Presentation] 幹細胞様がん細胞のABCトランスポーターと抗がん剤耐性 (2009)
  • Author(s): Naoya Fujita
  • Organizer: 第13回日本がん分子標的治療学会総会
  • Place of Presentation: ホテルクレメント徳島、徳島
  • Year and Date: 2009-06-25
• [Presentation] Dofequidar fumarate sensitizes Side Population cells to chemotherapeutic drugs by inhibiting ABCG2/BCRP-mediated drug export (2009)
  • Author(s): Ryohei Katayama
  • Organizer: 第13回日本がん分子標的治療学会総会
  • Place of Presentation: ホテルクレメント徳島、徳島
  • Year and Date: 2009-06-24
• [Presentation] Novel cross-talk between circadian rhythms and AKT (2008)
  • Author(s): 大原智子
  • Organizer: 第67回日本癌学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場、愛知
  • Year and Date: 2008-10-28
• [Presentation] TUSC4/NPRL2, a novel PDK1-interacting protein, inhibits PDK1 tyrosine phosphorylation and its downstream signaling (2008)
  • Author(s): 片山量平
  • Organizer: 第67回日本癌学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場、愛知
  • Year and Date: 2008-10-28
• [Presentation] Drug resistance mediated by survival- and growth-promoting signaling pathways (2008)
  • Author(s): 藤田直也
  • Organizer: 第67回日本癌学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場、愛知
  • Year and Date: 2008-10-28
• [Presentation] Pim kinases promote cell cycle progression by phosphorylating and down-regulating p27^<Kip1> at the transcriptional and post-transcriptional levels (2008)
  • Author(s): Daisuke Morishita
  • Organizer: Keystone Symposia -Stem Cells, Cancer and Aging-
  • Place of Presentation: Singapore、Singapore
  • Year and Date: 2008-10-03
• [Presentation] Metastasis suppressor CD9 inhibits platelet aggregation (2008)
  • Author(s): Youya Nakazawa
  • Organizer: The 12th International Congress of Metastasis Research Society
  • Place of Presentation: Vancouver、Canada
  • Year and Date: 2008-08-04
• [Presentation] Tetraspanin family CD9による転移抑制機構の解析 (2008)
  • Author(s): 中澤侑也
  • Organizer: 第17回日本がん転移学会総会
  • Place of Presentation: 鹿児島サンロイヤルホテル、鹿児島
  • Year and Date: 2008-07-25
• [Presentation] Chemoresistance in breast cancer stem-like cells (2008)
  • Author(s): Naoya Fujita
  • Organizer: Second JCA-AACR Special Joint Conference
  • Place of Presentation: 淡路路夢舞台、兵庫
  • Year and Date: 2008-07-16
• [Presentation] 新規TRAIL受容体結合タンパク質PRMT5によるNF-κBの活性化を介したTRAIL誘導性細胞死の制御 (2008)
  • Author(s): 藤田直也
  • Organizer: 第12回がん分子標的治療研究会
  • Place of Presentation: 学術総合センター、東京
  • Year and Date: 2008-06-27
• [Remarks]
  • URL: http://www.jfcr.or.jp/laboratory/ccc/fundamental/index.html
• [Remarks]
  • URL: http://www.jfcr.or.jp/laboratory/ccc/fundamental/index.html