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除去可能である新規遺伝子治療用人工染色体ベクターの開発

Research Project

Project/Area Number 20659052
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Human genetics
Research InstitutionTottori University

Principal Investigator

押村 光雄  Tottori University, 大学院・医学系研究科, 教授 (20111619)

Project Period (FY) 2008 – 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Fiscal Year 2008: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywordsヒト人工染色体 / コンディショナル遺伝子発現 / ヒト人工染色体ベクター
Research Abstract

現在、遺伝子改変技術を用いた遺伝子発現研究は数多く報告されているが、遺伝子または遺伝子発現が不要になった場合、遺伝子を除去する理想的なシステムは確立されていない。
本研究では、宿主染色体に組み込まれず安定に保持される、かつ任意に除去可能なヒト人工染色体(Human Artificial Chromosome : HAC) (Nakano et al., Dev. Cell 2008)を外来遺伝子導入可能なものにするためloxP配列を導入することを目的としている。
初年度において、構築してきたHACベクターへの遺伝子導入また遺伝子除去がヒト細胞において機能するかどうか検討した。EGFP遺伝子を導入したHACベクターを微小核細胞融合法によりヒトHT1080細胞へ移入を行った。FISH解析により、移入されたHACベクターはヒトHT1080細胞で安定かつ独立に保持されることを確認した。この細胞を薬剤選択なしで長期的に培養してもHACベクターは高い保持率を示すことが確認され、tTS遺伝子によるセントロメア不活化を誘導することでHACベクターは高効率で除去することに成功した。また、染色体改変を行うために用いられたトリDT40細胞、CHO細胞において、顕著なHACベクターの構造変化は確認されなかった(サザンプロット解析による)。上記に挙げたように外来遺伝子導入可能であり、また任意に遺伝子搭載ヒト人工染色体を除去できる系を研究実施計画通り進行した。

Report

(2 results)
  • 2009 Annual Research Report
  • 2008 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2009 2008

All Presentation (3 results)

  • [Presentation] A novel non-integrated human artificial chromosome vector carrying a conditional centromere2009

    • Author(s)
      飯田雄一
    • Organizer
      American society of human genetics ASHG 59th meeting
    • Place of Presentation
      Hawaii, USA
    • Year and Date
      2009-10-21
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] Towards reversible immortalization of human mesenchymal stem cells using a human artificial chromosome carrying a conditional centromere2009

    • Author(s)
      飯田 雄一
    • Organizer
      Cambridge health institute's 16^<th> international Molecular medicine tri-conference
    • Place of Presentation
      San Francisco, USA
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Presentation] 除去可能なヒト人工染色体へのloxPサイト導入2008

    • Author(s)
      飯田 雄一
    • Organizer
      第131回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2008-12-10
    • Related Report
      2008 Annual Research Report

URL: 

Published: 2008-04-01   Modified: 2016-04-21  

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