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表面提示型蛍光タンパク質によるがん幹細胞の複重可視化とその応用

Research Project

Project/Area Number 20659062
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Experimental pathology
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

許 南浩  Okayama University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (70142023)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 片岡 健  岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (10293317)
Project Period (FY) 2008 – 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2008: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Keywordsがん幹細胞 / CD133 / プロモーター / 腫瘍 / 可視化
Research Abstract

がん幹細胞の存在が、がん治療後の再発や転移に大きく関わってくるため、がん幹細胞を標的とする治療法および診断法の開発が求められている。治療法および診断法を開発するためには、がん幹細胞の特性を解析しなければならない。しかし、がん幹細胞は不均一ながん細胞集団に非常に少ない割合でしか含まれていないため、効率良く単離できたとしてもその解析には困難を要する。それは、培養により純粋な細胞集団として増殖維持させることが極めて困難であるからである(特性の解析には大量の細胞数が必要)。
前回、がん幹細胞を選択的に強く蛍光標識し、単離することに成功したが、純粋ながん幹細胞として得られる数量が非常に少ないため、分子細胞生物学的手技による細胞特性の解析にはやはり困難を要した(培養により増殖させると分化により性質が変化する)。この問題を解決するために今回、単一の性質を示すがん幹細胞をクローン化し、増殖させるためのコンストラクトを開発した。
幹細胞に選択的に発現しているCD133遺伝子を選択し、このプロモーター制御下に薬剤耐性遺伝子(ハイグロマイシン性遺伝子)を挿入した新規コンストラクトを作製した。前立腺がん細胞株PC3にトランスフェクションし、ハイグロマイシン添加培地により増殖してくる細胞群を得た。さらに、シングルセルクローニングを行い、最終的に4種のクローンを得る事に成功した。いずれもCD133を高レベルに発現維持していることを確認した。形態は、球形で浮遊性に富んだ性質を示した。また、親株に比較して非常に転移能が高い事も動物実験より判明した。これらの細胞は、抗生物質添加培地で培養している限り、同じ特性を示すため(分化の方向に進むと抗生物質により淘汰される)、がん幹細胞の特性解析において非常に有用な材料となりうることが大いに期待された。
一方、各種がん細胞株を検索し、CD133を高率に(90%以上)発現しているがん細胞株を同定した。この細胞は非常に心性であり、高度の転移・浸潤能をもつ。本細胞株は自然に幹細胞様特性を獲得したがん細胞の形質を抑制する研究や、CD133遺伝子発現調節の解析に好適である。

Report

(2 results)
  • 2009 Annual Research Report
  • 2008 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2010 2009 2008

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (3 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Down-regulation of BiP/GRP78 sensitizes resistant prostate cancer cells to gene-therapeutic overexpression of REIC/Dkk32010

    • Author(s)
      Tanimoto R, Sakaguchi M, Abarzua F, Kataoka K, Kurose K, Murata H, Nasu Y, Kumon H, Huh NH
    • Journal Title

      Int J Cancer 126

      Pages: 1562-1569

    • NAID

      120004724432

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Overexpression of REIC/Dkk-3 in normal fibroblasts suppresses tumor growth via induction of IL-72009

    • Author(s)
      Sakaguchi M, Kataoka K, Abarzua F, Tanimoto R, Watanabe M, Murata H, Than SS, Kurose K, Kashiwakura Y, Ochiai K, Nasu Y, Kumon H, Huh NH
    • Journal Title

      J Biol Chem 284

      Pages: 14236-14244

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Suppression of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis by transplantation of a clonal mesenchymal stem cell line derived from rat bone marrow2009

    • Author(s)
      Hardjo M, Miyazaki M, Sakaguchi M, Masaka T, Ibrahim S, Kataoka K, Huh NH
    • Journal Title

      Cell Transplant 18

      Pages: 89-99

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Immunological aspects of REIC/Dkk-3 in monocyte differentiation and tumor regression2009

    • Author(s)
      Watanabe, et al.
    • Journal Title

      Int J Oncol 34・3

      Pages: 657-663

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mechanistic analysis of resistance to REIC/Dkk-3-induced apoptosis in human bladder cancer cells2008

    • Author(s)
      Kobayashi, et al.
    • Journal Title

      Acta Med Okayama 62・6

      Pages: 393-401

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Down-regulation of inhibition of differentiation-1 via activation of activating transcription factor 3 and Smad regulates REIC/Dickkopf-3-induced apoptosis2008

    • Author(s)
      Kashiwakura, et al.
    • Journal Title

      Cancer Res 68・20

      Pages: 8333-8341

    • Related Report
      2008 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Normal human fibroblasts mis-targetedly infected with adenovirus REIC have a tumor-suppressive ability in vivo2009

    • Author(s)
      阪口政清、片岡健、フェルナンドアバルスア、谷本竜太、渡邉昌美、村田等、スエスエタン、那須保友、公文裕巳、許南浩
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2009-12-12
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] Promoter-based improvement of gene expression in cancer therapeutic adenovirus vector carrying REIC/Dkk-32009

    • Author(s)
      阪口政清、片岡健、村田, 等、許南浩
    • Organizer
      第68回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2009-10-03
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] Transduction of gene therapeutic REIC/Dkk-3 into normal cells provides another arm for tumor suppression in vivo.2008

    • Author(s)
      片岡 健
    • Organizer
      第67回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2008-10-28
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Book] 培養細胞実験ハンドブック2009

    • Author(s)
      許 南浩
    • Total Pages
      330
    • Publisher
      羊土社
    • Related Report
      2008 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 遺伝子発現を上昇させるシステム及び該システムを保持したベクター2009

    • Inventor(s)
      阪口政清、公文裕巳、許南浩、渡邉昌美
    • Industrial Property Rights Holder
      岡山大学
    • Industrial Property Number
      2009-264299
    • Filing Date
      2009-11-19
    • Related Report
      2009 Annual Research Report

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Published: 2008-04-01   Modified: 2016-04-21  

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