GM-CSF中和能の新規アッセイ法の確立

• Project/Area Number: 20659130
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Respiratory organ internal medicine
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 中田 光 Niigata University, 医歯学総合病院, 教授 (80207802)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田澤 立之 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (70301041) ; 瀧澤 淳 新潟大学, 超域研究機構, 助教 (70463990)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2009: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000); Fiscal Year 2008: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
• Keywords: 肺胞蛋白症 / 抗GM-CSF自己抗生 / 無細胞系 / 結合定数 / Soluble GM-CSF receptor / 抗GM-CSF自己抗体

Research Abstract

GM-CSF自己抗体価は、自己免疫性肺胞蛋白症の重症度と相関しない。我々は、中和能が治療予後とよく相関することを見出した。しかしながら、現行のTF-1細胞を用いたバイオアッセイ法は手技が煩雑な上、再現性に乏しい。GM-CSFシグナル伝達は、細胞膜上に存在しているGM-CSF受容体とGM-CSFが結合することによって惹起されている。そのため、soluble GM-CSF receptor(sGMR)を用いた無細胞系の中和能測定を目指している。平成20年度にトランスジェニックカイコを用いて組み替えヒトsGMRを得て、ビオチン標識したGM-CSFとプレートに固相化しsGMRを用いた無細胞アッセイを作成した。
平成21年度には、このアッセイを用いて、自己免疫性肺胞蛋白症の患者血漿からGM-CSFアフィニティ精製したGM-CSF精製抗体と患者血清中のIgG分画存在下で、GM-CSFとGM-CSF受容体の結合阻害能を調べた。その結果、従来の中和能測定法であるGM-CSF依存性のTF-1細胞を用いたバイオアッセイに比べ、再現性が良く、且つ結合阻害能と中和能は相関していた。このことから、無細胞アッセイで求めた結合阻害能がGM-CSF自己抗体の中和能を反映していることを示している。

Research Products

• [Journal Article] High avidity cytokine autoantibodies in health and disease : Pathogenesis and Mechanisms. (2010)
  • Author(s): Watanabe M, Uchida K, Nakagaki K, Trapnell BC, Nakata K
  • Journal Title: Cytokine & Growth Factor Reviews (in Press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Patient-derived GM-CSF Autoantibodies Reproduce Pulmonary Alveolar Proteinosis in Non-human Primates. (2010)
  • Author(s): Sakagami T, Beck D, Uchida K, Suzuki T, Carey BC, Nakata K, Keller G, Wood RE, Wert SE, Ikegami M, Whitsett JA, Luisetti M, Davies S, Krischer JP, Brody A, Ryckman F, Trapnell BC.
  • Journal Title: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine (in Press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pulmonary alveolar proteinosis associated with dust inhalation : not secondary but autoimmune? (2010)
  • Author(s): Costabel U, Nakata K.
  • Journal Title: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 181 Pages: 427-428
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhaled Granulocyte/Macrophage-Colony Stimulating Factor as Therapy of Pulmonary Alveolar Proteinosis. (2010)
  • Author(s): Tazawa R, Trapnell BC, Inoue Y, Arai T, Takada T, Nasuhara Y, Hizawa N, Kasahara Y, Tatsumi K, Hojo M, Ishii H, Yokoba M, Tanaka N, Yamaguchi E, Eda R, Tsuchihashi Y, Morimoto K, Akira M, Terada M, Otsuka J, Ebina M, Kaneko C, Nukiwa T, Krischer JP, Akazawa K, Nakata K.
  • Journal Title: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine (in Press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative Study of High-Resolution CT Findings Between Autoimmune and Secondary Pulmonary Alveolar Proteinosis. (2009)
  • Author(s): Ishii H, Trapnell BC, Tazawa R, Inoue Y, Akira M, Kogure Y, Tomii K, Takada ; T, Hojo M, Ichiwata T, Goto H, Nakata K,
  • Journal Title: Chest. 136 Pages: 1348-1355
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression of Th2-skewed pathology mediators in monocyte-derived type 2 of dendritic cells (DC2). (2009)
  • Author(s): Hata M, Takahara S, Tsuzaki H, Ishii Y, Nakata K, Akagawa KS, Satoh K.
  • Journal Title: Immunol Letter 126 Pages: 29-36
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] HIdentification of MICA as a susceptibility gene for pulmonary Mycobacterium avium complex infection. (2009)
  • Author(s): Shojima J, Tanaka G, Keicho N, Tamiya G, Ando S, Oka A, Inoue Y, Suzuki K, Sakatani M, Okada M, Kobayashi N, Toyota E, Kudo K, Kajiki A, Nagai H, Kurashima A, Oketani N, Hayakawa H, Takemura T, Nakata K, Ito H, Morita T, Matsushita I, Hijikata M, Sakurada S, Sasazuki T, Inoko
  • Journal Title: The Journal of infectious diseases 199 Pages: 1707-1715
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Reciprocal CD4+T-CeII Balance of Effector CD62LIOW CD4+and CD62LhighCD25+CD4+Regulatory T Cells in Small Cell Lung Cancer Reflects Disease stage (2008)
  • Author(s): Kenichi Koyama, Hiroshi Kagamu, Satoru Miura, ToruHiura, Takahiro Miyabayashi, Ryo Itoh, Hideyuki Kuriyama, Hiroshi Tanaka, Junta Tanaka, Hirohisa Yoshizawa, Koh Nakata, Fumitake Gejyo.
  • Journal Title: Clin Cancer Res 14 Pages: 6770-6779
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Characteristics of a large cohort of patients with autoimmune pulmonary alveolar proteinosis in Japan. (2008)
  • Author(s): Inoue Y, Trapnell BC, Tazawa R, Arai T, Takada T, Hizawa N, Kasahara Y TatsumiK, Hoio M, Ichiwata T, Tanaka N, Yamaguchi E, Eda R, Oishi K, Tsuchihashi Y, Kaneko c, Nukiwa T, Sakatani M, Krischer J p, Nakata K
  • Journal Title: Am J Respir Crit Care Med. 177 Pages: 752-762
  • Peer Reviewed
• [Presentation] A Cell-Free Assay System To Estimate GM-CSF Neutralizing Capacity in Autoimmuno Pulmonary Alveolar Proteinosis (2009)
  • Author(s): Urano S, Tomita M, Motoi N, Sato A, Trapnell BC, Nakata K
  • Organizer: American Thoracic Society International Conference 2009
  • Place of Presentation: the United States of America (San Diego)
  • Year and Date: 2009-05-18
• [Presentation] 教育講演肺胞蛋白症の最前線 (2008)
  • Author(s): 中田 光
  • Organizer: 第48回日本呼吸器学会学術講演会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-06-16
• [Book] EBM呼吸器疾患の治療一肺胞蛋白症 (2008)
  • Author(s): 高田俊範中田光
  • Publisher: 中外医学社
• [Patent(Industrial Property Rights)] 中和抗体など生理活性タンパク質の活性と拮抗し制御する物質の測定方法、生理活性タンパク質とその受容体との結合を制御する物質のスクリーニング方法、および、生理活性タンパク質の受容体への結合を制御する物質を検出するためのキット (2009)
  • Inventor(s): 中田光, 他
  • Industrial Property Rights Holder: 新潟大学、ネオシルク
  • Industrial Property Number: 2009-119320
  • Filing Date: 2009-05-15