レトロウイルス発現系を用いた発癌関連miRNAの探索
Project/Area Number |
20659151
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Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
Hematology
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Research Institution | Mie University |
Principal Investigator |
野阪 哲哉 三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30218309)
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Project Period (FY) |
2008 – 2010
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
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Budget Amount *help |
¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2009: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2008: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
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Keywords | miRNA / microRNA / レトロウイルスベクター / 発癌 / 造血細胞腫瘍 |
Research Abstract |
当研究の目的は、遺伝子発現効率の良いレトロウイルス発現系を用いて、主に造血器腫瘍に関与するマウスmicroRNA(miRNA)を同定し、新規の発癌分子機構を明らかにするとともに、新たな治療法の開発に応用することである。 我々はまず、MLL(Mixed Lineage Leukemia)関連白血病の癌化に関連するようなmiRNAの探索から開始した。最初に、4-hydroxytamoxifen(4-HT)の除去によりMLL-ENL(-Estrogen Receptor(ER))の作用を消失させた時に、造血細胞において発現レベルが変化するmiRNAをmicroarrayにて探索した。その結果、miR-XXX(未発表データ)の発現上昇が観察され、real time PCR法にて、確認した。miR-XXX自体は癌抑制遺伝子的に働いている可能性が考えられる。即ち、癌遺伝子的に働く遺伝子の発現を抑える遺伝子である可能性が高い。次に、MLL-ENLでtransformした細胞におけるmiR-XXXの強発現や、造血細胞におけるmiR-XXXのノックダウンの表現型を解析し、その標的遺伝子を明らかにする目的で、U6プロモーターを用いた、shRNA発現用のレトロウイルスself-inactivationベクターを構築した。現在、miR-XXXの機能解析を行い、引き続き、他のmiRNAの探索・機能解析も行っている。上記shRNA発現用レトロウイルスベクターは初代培養細胞などで特定の遺伝子を手軽に恒常的にノックダウンさせ、当該遺伝子機能を解析する際にも役立つ。実際、純化した造血幹細胞を用いて、それらの細胞において特異的に発現している遺伝子を複数同定したが(未発表データ)、それらをノックダウンすることにより、造血幹細胞における癌遺伝子発現による癌化が部分的に抑制されることが判明した。 miRNAを含めた統合的遺伝子機能解析が造血器腫瘍発生機構の解明にとって重要である。
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Report
(3 results)
Research Products
(31 results)
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[Journal Article] Expression of ADAMTS4 in Ewing's sarcoma.2010
Author(s)
Minobe K, Ono R, Matsumine A, Shibata-Minoshima F, Izawa K, Oki T, Kitaura J, Iino T, Takita J, Iwamoto S, Hori H, Komada Y, Uchida A, Hayashi Y, Kitamura T, Nosaka T.
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Journal Title
Int J Oncol
Volume: 37
Pages: 569-581
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[Journal Article] Cv2, functioning as a pro-BMP factor via twisted gastrulation, is required for early development of nephron precursors.2010
Author(s)
Ikeya M, Fukushima K, Kawada M, Onishi S, Furuta Y, Yonemura S, Kitamura T, Nosaka T, Sasai Y.
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Journal Title
Dev Biol
Volume: 337
Pages: 405-414
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Ikeya M, Fukushima K, Kawada M, Onishi S, Furuta Y, Yonemura S, Kitamura T, Nosaka T, Sasai Y.
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Journal Title
Dev Biol 337
Pages: 405-414
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[Journal Article] Mixed-lineage-leukemia (MLL) fusion protein collaborates with Ras to induce acute leukemia through aberrant Hoxexpression and Raf activation2009
Author(s)
Ono R, Kumagai H, Nakajima H, Hishiya A, Taki T, Horikawa K, Takatsu K, Satoh T, Hayashi Y, Kitamura T, Nosaka T.
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Journal Title
Leukemia 23
Pages: 2197-2209
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[Journal Article] Possible involvement of RasGRP4 in leukemogenesis2009
Author(s)
Watanabe-Okochi N, Oki T, Komeno Y, Kato N, Yuji K, Ono R, Harada Y, Harada H, Hayashi Y, Nakajima H, Nosaka T, Kitaura J, Kitamura T.
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Journal Title
Int J Hematol 89
Pages: 470-481
NAID
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[Journal Article] A Rac GTPase activating protein MgcRacGAP is an NLS-containing nuclear chaperone in the activation of STAT transcription factors2009
Author(s)
Kawashima T, Bao YC, Minoshima Y, Nomura Y, Hatori T, Hori T, Fukagawa T, Fukada T, Takahashi N, Nosaka T, Inoue M, Sato T, Kukimoto-Niino M, Shirouzu, M, Yokoyama S, Kitamura T.
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Journal Title
Mol Cell Biol 29
Pages: 1796-1813
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[Journal Article] C/EBPα and C/EBPε induce the monocytic differentiation of myelomoncytic cells with the MLL-chimeric fusion gene.2008
Author(s)
Matsushita H, Nakajima H, Nakamura Y, Tsukamoto H, Tanaka Y, Jin G, Yabe M, Asai S, Ono R, Nosaka T, Sugita K, Morimoto A, Hayashi Y, HottaT, Ando K, Miyachi H.
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Journal Title
Oncogene 27
Pages: 6749-6760
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[Journal Article] A Rac GTPase activating protein MgcRacGAP is an NLS-containing nuclear chaperone in the activation of STAT transcription factors.2008
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Kawashima T, Bao YC, Minoshi ma Y, Nomura Y, Hatori T, hori T, Fukagawa T, Fukada T, Takahashi N, Nosaka T, Inoue M, Sato T, Kukimoto-Niino M, Shirouzu M, Yokoyama S, Kitamura T.
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Journal Title
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[Presentation] Differential role of myeloid transcription factors, C/EBPα and PU.1 in leukemogenesis by MLL-fusion oncogenes2010
Author(s)
Fukuchi Y, Kuroda K, Sadahira K, Ono R, Tenen DG, Kitamura T, Nosaka T, Okamaoto S, Nakajima H.
Organizer
第52回アメリカ血液学会
Place of Presentation
Orlando, FL, USA
Year and Date
2010-12-04
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[Presentation] Analysis of novel molecular mechanism in transformation by MLL-ENL targeting long-term hematopoietic stem cells.2010
Author(s)
Ono R, Masuya M, Nakajima H, Enomoto Y, Miyata E, Kamisako T, Ito M, Suzuki K, Katayama N, Kitamura T, Nosaka T.
Organizer
第69回日本癌学会学術総会
Place of Presentation
大阪
Year and Date
2010-09-22
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