リアルタイムPCRの融解曲線を利用した遺伝子突然変異スクリーニング法の開発

• Project/Area Number: 20659157
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 膠原病・アレルギー・感染症内科学
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 江口 勝美 Nagasaki University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30128160)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井田 弘明 長崎大学, 病院, 講師 (60363496) ; 吉浦 孝一郎 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (00304931)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2009: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000); Fiscal Year 2008: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
• Keywords: 遺伝子 / 突然変異 / スクリーニング / PCR / 自己炎症 / 融解曲線 / TRAPS

Research Abstract

遺伝子変異のスクリーニングとして、PCR-SSCP(single strand conformation polymorphism)法が用いられてきたが、煩雑なうえに、その検出率はおよそ70%程度であり、スクリーニング法としては一般化されていない。自己炎症疾患に限らず、ミスセンス突然変異は多くの疾患でみられる。ミスセンス突然変異は、ヘテロ接合である。本研究は、高性能となったリアルタイムPCRの融解曲線を利用して、正常人のホモ接合との差を検出し、遺伝子異常のスクリーニングに使用することを目指した。LightCycler 480(Roche社)は高性能であり、ジェノタイピングのハイスループット判定にも利用されていることから、ミスセンス突然変異の検出は可能と考え検討した。
平成20年度からの2年間の研究で、LC Green色素の蛍光強度の融解曲線から突然変異の有無を検出することに成功した。TRAPS患者の遺伝子(T61I変異)を1例混ぜ、LC Green色素の蛍光強度の融解曲線を解析したところ、正常人95例と比較して突然変異の有無が曲線の変化で検出可能であった。この方法は簡便でスピーディー、しかも確実な検出法であった。今後、このシステムを使って、遺伝性の自己炎症疾患(Familial Mediterranean fever(家族性地中海熱;FMF)、TNF receptor-associated periodic syndrome(TRAPS))のスクリーニングが可能となることが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Different expression levels of TNF receptors on the rheumatoid synovial macrophages derived from surgery and a synovectomy as detected by a new flow cytometric analysis. (2009)
  • Author(s): Ida H, Aramaki T, Nakamura H, Fujikawa K, Arima K, Tamai M, Kamachi M, Satoh K, Origuchi T, Kawakami A, Furuichi I, Kawabe Y, Eguchi K.
  • Journal Title: Cytotechnology 60(1-3) Pages: 161-164
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A significantly impaired natural killer cell activity due to a low activity on a per-cell basis in rheumatoid arthritis. (2009)
  • Author(s): Aramaki T, Ida H, Izumi Y, Fujikawa K, Huang M, Arima K, Tamai M, Kamachi M, Nakamura H, Kawakami A, Origuchi T, Matsuoka N, Eguchi K.
  • Journal Title: Mod Rheumatol 19(3) Pages: 245-252
  • NAID: 10025112851
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A prediction rule for disease outcome in patients with undifferentiated arthritis using magnetic resonance imaging of the wrists and finger joints and serologic autoantibodies. (2009)
  • Author(s): Tamai M, Kawakami A, Uetani M, Takao S, Arima K, Iwamoto N, Fujikawa K, Aramaki T, Kawashiri S, Ichinbse K, Kamachi M, Nakamura H, Origuchi T, Ida H, Aoyagi K, Eguchi K
  • Journal Title: Arthritis Rheum 61(6) Pages: 772-778
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Proinflammatory cytokines synergistically enhance the production of chemokine ligand 20(CCL20)from rheumatoid fibroblast-like synovl cells in vitro and serum CCL20 is reduced in vivo by biologic d〓ase-modifying antirheumatic drugs. (2009)
  • Author(s): Kawashiri S, Kawakami A, Iwamoto N, Fujikawa K, Aramaki T, Tamai M, Arima K, Kamachi M, Yamasaki S, Nakamura H, Tsurumoto T, Kono M, Shindo H, Ida H, Origuchi T, Eguchi K.
  • Journal Title: J Rheumatol 36(11) Pages: 2397-2402
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Genetic association between the interleukin-2 receptor-alpha gene and mode of onset of type 1 diabetes in the Japanese population. (2009)
  • Author(s): Kawasaki E, Awata T, Ikegami H, Kobayashi T, Maruyama T, Nakanishi K, Shimada A, Uga M, Kurihara S, Kawabata Y, Tanaka S, Kanazawa Y, Eguchi K.
  • Journal Title: J Clin Endocrinol Metab 94(3) Pages: 947-952
  • NAID: 120006984659
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A case of periodic-fever-syndrome-like disorder with lipodystrophy, myositis, and autoimmune abnormalities. (2008)
  • Author(s): Kasagi S, Kawano S, Nakazawa T, Sugino H, KoshibaM, IchinoseK, Ida H, Eguchi K, Kumagai S
  • Journal Title: Mod Rheumatol 18(2) Pages: 203-207
  • NAID: 10024150509
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] TRAPSの分子病態. (2008)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美.
  • Journal Title: 炎症と免疫 16(2) Pages: 139-148
• [Journal Article] TNF receptor-associated periodic syndrome (TRAPS)の全国疫学調査. (2008)
  • Author(s): 井田弘明, 一瀬邦弘, 荒牧俊幸, 右田清志, 江口勝美.
  • Journal Title: 小児科 49(10) Pages: 1349-1356
• [Presentation] TNF receptor-associated periodic syndrome(TRAPS)in Japan. (2009)
  • Author(s): Ida H, Arima K, Kawakami A, Migita K, Eguchi K.
  • Organizer: 9th World Congress on Inflammation.
  • Place of Presentation: Tokyo.
• [Presentation] Autoinflammatory syndrome from the aspect of internal medicine. (2009)
  • Author(s): Ida H, Arima K, Eguchi K.
  • Organizer: 9th World Congress on Inflammation.
  • Place of Presentation: Tokyo.
• [Presentation] ポストゲノム時代の蛋白機能解析における自己炎症疾患の役割の検討. (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 有馬和彦, 一瀬邦弘, 三嶋博之, 吉浦孝一郎, 江口勝美.
  • Organizer: 第106回日本内科学会総会・講演会.
  • Place of Presentation: 東京.
• [Presentation] RAPS全国疫学調査とTRAPSが疑われた不明熱症例の検討(第3報) (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 荒牧俊幸, 有馬和彦, 川尻真也, 岩本直樹, 藤川敬太, 蒲池誠, 玉井慎美, 中村英樹, 折口智樹, 川上純, 右田清志, 江口勝美.
  • Organizer: 第53回日本リウマチ学会総会・学術集会.
  • Place of Presentation: 東京.
• [Presentation] ポストゲノム時代の蛋白機能分析における自己炎症囎の役割検討. (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 有馬和彦, 一瀬邦弘, 江口勝美.
  • Organizer: 第53回日本リウマチ学会総会・学術集会.
  • Place of Presentation: 東京.
• [Presentation] 周期性関節水腫を認め家族性地中海熱(FMF)が疑われた1例. (2009)
  • Author(s): 右田清志, 鳥越雄史, 本川哲, 宮下賜一郎, 和泉泰衛, 小森敦正, 伊東正博, 中村稔, 石橋大海, 安波道郎, 江口勝美.
  • Organizer: 第38回九州リウマチ学会.
  • Place of Presentation: 久留米.
• [Presentation] TRAPS全国疫学調査とTRAPSが疑われた不明熱症例の検討. (2008)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美, 他.
  • Organizer: 第52回 日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] 本邦における自己炎症症候群の定義の検討. (2008)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美, 他.
  • Organizer: 第52回 日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] 周期性発熱を来たした筋炎の-症例. (2008)
  • Author(s): 笠木伸平, 井田弘明, 江口勝美, 他.
  • Organizer: 第52回 日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] 本邦における自己炎症疾患の現状と定義の検討. (2008)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美, 他.
  • Organizer: 第52回 日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Book] 日本臨床 (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美.
  • Total Pages: 11
  • Publisher: 特論 新しい疾患概念「自己炎症症候群」
• [Book] 臨床リウマチ (2009)
  • Author(s): 井田弘明.
  • Total Pages: 3
  • Publisher: 関節リウマチとNK細胞
• [Book] 感染・炎症・免疫 (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美.
  • Total Pages: 14
  • Publisher: Autoinflammation(自己炎症)
• [Book] Topics in Atopy (2009)
  • Author(s): 井田弘明, 江口勝美.
  • Total Pages: 5
  • Publisher: 自己炎症疾患(遺伝性周期熱症候群)とは