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Proteolipid of vacuolar H+-ATPase of Plasmodium falciparum

Research Project

Project/Area Number 20790094
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Biological pharmacy
Research InstitutionNational Institute of Advanced Industrial Science and Technology

Principal Investigator

YATSUSHIRO Shouki  National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, 健康工学研究センター, 研究員 (90399155)

Project Period (FY) 2008 – 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2008: ¥2,730,000 (Direct Cost: ¥2,100,000、Indirect Cost: ¥630,000)
Keywords感染症 / マラリア原虫 / 薬学 / マラリア
Research Abstract

本研究課題は「熱帯熱マラリア原虫における膜輸送蛋白質の同定と機能解析」と題し、特にヒト・マラリア原虫(Plasmodium falciparum)の赤血球内寄生時における原虫外膜系の形成機構と血球膜へのタンパク輸送機構を分子(蛋白質)レベルで解明することを目的として研究を遂行してきた。
平成20年度はその中でも特にこれまで明らかにしているN-ethylmaleimide-sensitive factorのマラリアホモログ(Pf NSF)が原を足がかりにいくつかの原虫由来の膜融合装置関連蛋白質について同定することを目指した。昆虫細胞を用いた強制発現系を用いてマラリアNSF(Pf NSF)を大量に発現させ、特異的抗体を駆使し膜融合装置関連蛋白質の候補を選び出した。これらの蛋白質の同定、生化学的、構造生物学的解析を行っていくことを考えている。さらに、赤血球内に寄生維持するマラリア原虫をこれら小胞輸送系を用いて簡便に検出できないかと考え、血中の特定蛋白質(バイオマーカー候補)の検出を念頭におき、簡便なバイオマーカー検出系の確立を試みた。その結果、極微量の全血をから血中のアミラーゼ活性を測定する方法を確立するにいたった(Maeda et al. 2008 Electrophoresis)。
平成21年度は昨年度より解析を進めているN-ethylmaleimide-sensitive factorのマラリアホモログ(Pf NSF)が原を足がかりに昆虫細胞を用いた強制発現系と特異的抗体を用いていくつかの原虫由来の膜融合装置関連蛋白質についていくつか候補タンパク質を見いだした(sec23ホモローグ等)。これらが本当に原虫とヒトの種の間の行き来に関与するのか?またその小胞輸送をコントロールしているのか?さらに今後はこれらの蛋白質の遺伝子とGFPを融合した遺伝子をマラリアに発現させる系を構築し、蛍光顕微鏡下で可視化する。合わせてマラリアに特定のプラスミ遺伝子を発現するプラスミドを把持したものを簡便に検出できないかと考え、プラスミドへのライゲーションをマイクロチップ電位泳動装置を用いて確認する方法を確立した(Umemoto et al. 2010 JPharm Biomed Anal.)。今後これらの原理を応用しつつ特定の遺伝子(プラスミド)を保持したマラリア原虫の検出を行いたい。

Report

(3 results)
  • 2009 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2008 Annual Research Report
  • Research Products

    (23 results)

All 2010 2009 2008 Other

All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 8 results) Presentation (7 results) Book (1 results) Remarks (3 results) Patent(Industrial Property Rights) (4 results)

  • [Journal Article] Analysis of DNA ligation by microchip electrophoresis.2010

    • Author(s)
      Umemoto Y, Kataoka M, Yatsushiro S, Yamamura S, Ooie T, Kido J, Yamamoto T, Shinohara Y, Baba Y.
    • Journal Title

      J Pharm Biomed Anal. 52(2)

      Pages: 323-328

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  • [Journal Article] Analysis of DNA ligation by microchip electrophoresis.2010

    • Author(s)
      Umemoto Y, Kataoka M, Yatsus hiro S, Yamamura S, Ooie T, Kido J, Yamamoto T, Shinohara Y, Raba Y.
    • Journal Title

      J Pharm Biomed Anal. 52(2)

      Pages: 323-328

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  • [Journal Article] Direct endonuclease digestion and multi-analysis of restriction fragment length polymorphisms by microchip electrophoresis.2009

    • Author(s)
      Akamine R, Yatsushiro S, Yamamura S, Kido J, Shinohara Y, Baba Y, Kataoka M.
    • Journal Title

      J Pharm Biomed Anal. 50(5)

      Pages: 947-953

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  • [Journal Article] Sequential analysis of RNA synthesis by microchip electrophoresis.2009

    • Author(s)
      Umemoto Y, Kataoka M, Yatsushiro S, Watanabe M, Kido J, Kakuhata R, Yamamoto T, Shinohara Y, Baba Y.
    • Journal Title

      Anal Biochem. 388(1)

      Pages: 161-163

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  • [Journal Article] マイクロチップ電気泳動の臨床検査への応用2009

    • Author(s)
      八代聖基、片岡正俊
    • Journal Title

      電気学会誌(C) 192(2)

      Pages: 282-287

    • NAID

      10023999782

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  • [Journal Article] Sequential analysis of RNA synthesis by microchip electrophoresis2009

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      Masahiro Umemoto, Masatoshi Kataoka, Shouki Yatsushiro, Masahiro Watanabe, Junishi Kido
    • Journal Title

      ANALYTICAL BIOCHEMISTRY (in press)

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      八代聖基、片岡正俊
    • Journal Title

      電気学会誌(C) 129(2)

      Pages: 282-287

    • NAID

      10023999782

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  • [Journal Article] Accurate quantitation of salivary and pancreatic amylase activities in human plasma by microchip electrophoretic separation of the substrates and hydrolysates coupled with immunoinhibition.2008

    • Author(s)
      Maeda E, Kataoka M, Yatsushiro S, Kajimoto K, Hino M, Kaji N, Tokeshi M, Bando M, Kido J, Ishikawa M, Shinohara Y, Baba Y.
    • Journal Title

      Electrophoresis 29(9)

      Pages: 1902-1909

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      八代聖基、山村昌平、山口裕加、片岡正俊
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      第17回分子原虫ワークショップ日
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      群馬
    • Year and Date
      2009-08-06
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    • Organizer
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      京都
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      2009-03-26
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      八代聖基、山村昌平、山口裕加、片岡 正俊
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      第50回日本熱帯医学会
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      沖縄
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      八代聖基、山村昌平、山口裕加、片岡 正俊
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      京都
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      第8回ナノバイオデバイスワークショップ
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      筑波
    • Year and Date
      2008-12-12
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      八代聖基、山村昌平、片岡正俊
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      第3回ナノバイオデバイスワークショップ
    • Place of Presentation
      筑波
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  • [Book] マラリア原虫の迅速診断法を開発(産総研TODAY)2010

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      八代聖基、山村昌平、片岡正俊
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      http://unit.aist.go.jp/htrc/

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    • Inventor(s)
      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Industrial Property Rights Holder
      産業技術総合研究所
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  • [Patent(Industrial Property Rights)] 抗原抗体反応を利用した標的物質検出用流路チップ2008

    • Inventor(s)
      田中正人、大家利彦、片岡正俊、八代聖基、中原伴徳、山瓶子勇次、日野真美
    • Industrial Property Rights Holder
      産業技術総合研究所
    • Industrial Property Number
      2008-334179
    • Filing Date
      2008-12-26
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      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Industrial Property Rights Holder
      産業技術総合研究所
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      2008-225193
    • Filing Date
      2008-09-02
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      田中正人、大家利彦、片岡正俊、八代聖基、中原伴徳、山瓶子勇次、日野真美
    • Industrial Property Rights Holder
      産業技術総合研究所
    • Industrial Property Number
      2008-165059
    • Filing Date
      2008-06-24
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Published: 2008-04-01   Modified: 2016-04-21  

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