卵巣癌がん幹細胞の上皮間葉転換の解析と上皮間葉転換制御による癌進展抑制の研究

• Project/Area Number: 20791141
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Obstetrics and gynecology
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 寺内 幹雄 名大, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60378122)
• Project Period (FY): 2008 – 2010
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000); Fiscal Year 2009: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2008: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
• Keywords: 癌幹細胞 / CD133 / 卵巣癌

Research Abstract

■婦人科癌幹細胞の分離・同定
癌幹細胞の分離方法として、(1)Hoechst33342の排出能を利用したSP細胞分離、(2)細胞表面マーカーを利用した幹細胞分離法、(3)Sphere形成法を利用した幹細胞分離法が挙げられるが、我々はCD133(prominin-1)を細胞表面幹細胞マーカーとして選択し、FACS vantage, MACS(Magnetic sorting system)を用いて婦人科癌細胞株からCD133+細胞を分離する事を試みた。
卵巣癌細胞株のCD133発現を検討し、卵巣癌細胞株OVCAR-3細胞と当院で樹立した卵黄嚢腫瘍細胞株NOY1細胞とNOY2細胞の3つの細胞でCD133発現を認めた。MACS(Magnetic sorting system)を用いて、卵黄嚢腫瘍細胞株NOY1細胞からCD133+細胞とCD133-細胞を分離した。MACSで分離したCD133+細胞を様々な増殖因子(rhEGF : recombinant human Epidermal Growth Factor, rhFGF-b : recombinant human Basic Fibroblast Growth Factor, Heparin etc)を追加した幹細胞専用培地で培養する事により、stemcell sphere(浮遊する幹細胞塊)の形成を確認した。またBLB/c nudeマウスにCD133+細胞とCD133-細胞を皮下注と腹腔内投与を行い、CD133-細胞では500万個投与でも腫瘍形成が見られなったのに対して、CD133+細胞では10万個で皮下腫瘍と腹膜播種形成を認めた。