ユビキチン様分子ISG15による翻訳制御の解明

• Project/Area Number: 20890004
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: General medical chemistry
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 奥村 文彦 北大, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00507212)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,302,000 (Direct Cost: ¥2,540,000、Indirect Cost: ¥762,000); Fiscal Year 2009: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2008: ¥1,742,000 (Direct Cost: ¥1,340,000、Indirect Cost: ¥402,000)
• Keywords: 国際情報交換 / アメリカ / ISG15 / キャップ構造 / タンパク質翻訳 / 4EHP / ユビキチン様分子 / インターフェロン

Research Abstract

1、4EHP-ISG15融合タンパク質による特異的結合mRNAの同定
脱ISG15酵素(基質分子よりISG15を取り除く酵素)であるUBP43のタンパク質発現を低下させた慢性骨髄性白血病(CML)細胞株KT-1細胞を用いた。この細胞株はインターフェロン刺激依存的な強いISG15修飾活性を示す。メッセンジャーRNAのキャップ構造結合分子である4EHPあるいはそのISG15修飾を模した4EHP-ISG15融合タンパク質を安定に発現するKT-1細胞株をレトロウイルス感染により樹立した。4EHP、4EHP-ISG15融合タンパク質を細胞溶解物より精製し、共精製されるメッセンジャーRNAをフェノール・クロロホルム抽出により得た。得られたメッセンジャーRNAは微量であるためPCRにより増幅した。増幅産物をビオチンで標識し、GeneChip Human Genome U133A 2.0 Array(Affymetrix)を用いたマイクロアレイにより解析した。その結果、4EHPが特異的に結合するメッセンジャーRNAとして少なくとも3つの候補分子を得た。現在その結果を裏付けるために4EHPあるいは4EHP-ISG15と共に精製されるメッセンジャーRNAを鋳型として、候補分子特異的なプライマーを用いたPCRを行い、特に4EHP-ISG15に優位に結合しているかを確認中である。
2、4EHP-ISG15融合タンパク質結合mRNAの分子生物学的解析
候補分子に対する抗体が市販されていたので4EHP-ISG15融合分子によりそれらのタンパク質分子が翻訳制御を受けているか検討中である。

Research Products

• [Journal Article] Nitrosylation of ISG15 prevents the disulfide bond mediated dimerization of ISG15 and contributes to effective ISGylation (2008)
  • Author(s): Fumihiko Okumura
  • Journal Title: The Journal of Biological Chemistry 5 ; 283(36) Pages: 24484-24488
  • Peer Reviewed
• [Presentation] メッセンジャーRNAキャップ構造結合分子eIF4E1ホモログ4EHPはユビキチン様分子ISG15修飾によりキャップ構造結合活性が増強される (2008)
  • Author(s): 奥村文彦
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2008-12-11
• [Presentation] ユビキチン様分子ISG15依存性翻訳制御による免疫制御の解明 (2008)
  • Author(s): 奥村文彦
  • Organizer: 日本生化学会北海道支部第45回例会
  • Place of Presentation: 北海道大学学術交流会館
  • Year and Date: 2008-08-08
• [Book] 生化学
  • Author(s): 奥村文彦
  • Publisher: (財)学会誌刊行センター(印刷中)