Dynamic in vivo fluorescence imaging analysis of Immunocytes relevant to salivary IgA production.
| Project/Area Number |
20H03902
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57080:Social dentistry-related
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
片岡 宏介 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 教授 (50283792)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
土居 貴士 大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (20388375)
河村 佳穂里 大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (20737019)
戸村 道夫 大阪大谷大学, 薬学部, 教授 (30314321)
三宅 達郎 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (40200141)
楠本 豊 大阪大谷大学, 薬学部, 准教授 (40252689)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥18,070,000 (Direct Cost: ¥13,900,000、Indirect Cost: ¥4,170,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,590,000 (Direct Cost: ¥4,300,000、Indirect Cost: ¥1,290,000)
Fiscal Year 2021: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Fiscal Year 2020: ¥9,620,000 (Direct Cost: ¥7,400,000、Indirect Cost: ¥2,220,000)
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| Keywords | 経鼻投与 / 唾液分泌型IgA抗体 / 樹状細胞 / B細胞 / 遺伝子改変マウス / マウス舌下唾液腺 / NALT / IgAクラススイッチング / KikGRマウス / Iμ-Cα transcripts / CD11c-YFPマウス / 顎下唾液腺 / AID / 唾液IgA抗体 |
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| Outline of Research at the Start |
唾液中の分泌型IgA(SIgA)抗体は、病原体や毒素の侵入阻止、排除を担う口腔免疫システムの中核となる宿主防御因子である。しかし口腔での外来抗原曝露後、ヒトではアデノイドをはじめとするワルダイエル扁桃輪、マウスでは鼻咽腔関連リンパ組織(NALT)といった免疫誘導組織から免疫実効組織唾液腺にいたるまでの抗原特異的SIgA抗体産生またその制御における一連の免疫担当細胞の動態については不明な点が多い。
本研究では、唾液腺における抗原特異的SIgA抗体産生メカニズムを明らかにするため、紫光反応性細胞を有する遺伝子改変マウスを用い、免疫誘導組織から唾液腺にいたるまでの免疫細胞の時系列的動態解析を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、免疫誘導組織鼻咽腔関連リンパ組織(NALT)を介した唾液抗原特異的分泌型IgA抗体の産生メカニズムを明らかにするためのリンパ球動態解析を行うことである。
昨年度は、経鼻ワクチン投与後NALT 樹状細胞が増加することが認められ、投与24時間後におけるNALT B細胞のAID遺伝子の強発現が認められ、また48時間後の顎下唾液腺B細胞においてもAID遺伝子強発現が認められたことから、NALT樹状細胞がNALTおよび顎下唾液腺のB細胞クラススイッチングを誘導している可能性を示唆した。
２年目の本年度は、NALTおよび顎下唾液腺におけるB細胞が同部でIgAクラススイッチングが起こっているのかを、Iμ-Cα transcripts 遺伝子の発現により検討を行ったところ、経鼻ワクチン投与後24時間後のNALT B細胞、48時間後の顎下唾液腺 B細胞において、Iμ-Cα transcripts遺伝子の有意な発現が認められた。
さらに、波長436 nmのUV光を照射することにより緑色から赤色に変化する細胞を有するKikGRマウスを用い、NALT部への光照射後の顎下唾液腺、耳下唾液腺、舌下唾液腺における樹状細胞およびB細胞の動態解析をフローサイトメトリー法を用い行った。すなわち光照射24時間後におけるPhycoerythrin (PE)標識細胞を抗CD11c抗体、抗B220抗体染色によるポピュレーション解析を行なったところ、顎下唾液腺および耳下唾液腺におけるNALT 樹状細胞、NALT B細胞と比較して、舌下腺におけるNALT 樹状細胞、NALT B細胞のポピュレーションが高く認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナウイルス感染拡大のため、実験試薬、実験動物の搬入に時間を要し、唾液腺に関わるリンパ節における実験が遂行できておらず、また、唾液腺における実験回数も限定されており、やや遅れが生じている。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度に行ったKikuGRを用いた顎下唾液腺、耳下唾液腺、舌下唾液腺における樹状細胞およびB細胞の動態解析実験を繰り返す。
小腸粘膜固有層のIgA陽性B細胞がケモカインレセプターCCR9、CCR10、CXCR4が高発現により粘膜固有層へのホーミングに寄与することから、週1回合計3回の経鼻ワクチンをwild typeマウス(8週齢・メス)に投与24時間後のwild typeマウスのNALT、頸部リンパ節、3大唾液腺からIgA陽性B細胞におけるCCR9、CCR10、CXCR4遺伝子発現を検証する。
さらに、ワクチン投与後のwild typeマウスの頸部リンパ節、顎下リンパ節、3大唾液腺を摘出し、IgA抗体産生形質細胞のポピュレーション解析を蛍光標識抗CD138抗体および抗IgA抗体、抗IgD抗体、抗B220抗体によるフローサイトメトリーにより行う。また同部のCD4陽性T細胞をOVA抗原刺激時の産生サイトカイン（TGF-beta、IL-5、IL-6)をReal-time PCR法により解析を行う予定である。
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Report
(2 results)
Research Products
(15 results)
