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PDIファミリー酵素が触媒する翻訳途上新生鎖の酸化的フォールディング機構の解析

Research Project

Project/Area Number 20J11932
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Review Section Basic Section 43020:Structural biochemistry-related
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

平山 千尋  東北大学, 生命科学研究科, 特別研究員(DC2)

Project Period (FY) 2020-04-24 – 2022-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2020)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywords新生鎖 / ジスルフィド結合 / PDIファミリー酵素
Outline of Research at the Start

真核生物において、リボソームで翻訳された新生ポリペプチド鎖 (以下、新生鎖)の約30%は小胞体内に挿入され、ジスルフィド結合の形成を伴った立体構造形成 (酸化的フォールディング)を経て天然型の立体構造を獲得する。この過程で、PDIファミリー酵素が「翻訳中」の新生鎖にジスルフィド結合を導入することで、効率的に酸化的フォールディングを促進すると考えられているが、この過程のメカニズムの理解は進んでいない。本研究では、翻訳途上の新生鎖の酸化的フォールディングを触媒するPDIファミリー酵素の作用機序の解明を目指す。

Outline of Annual Research Achievements

真核生物において、リボソームで翻訳された新生ポリペプチド鎖 (以下、新生鎖)の約30%は小胞体内に挿入され、ジスルフィド結合の形成を伴った酸化的フォールディングを経て天然型の立体構造を獲得する。この過程で、Protein Disulfide Isomerase (PDI)ファミリー酵素が「翻訳中」の新生鎖にジスルフィド結合を導入することで、より効率的に酸化的フォールディングを促進すると考えられている。本研究では、翻訳中の新生鎖に対してはたらきかけるPDIファミリー酵素、PDIとERp46の作用機序の解明を目指し、主に2つのアプローチを用いて解析を進めている。第1のアプローチとして「翻訳中の新生鎖へのジスルフィド結合導入を経時的にモニタリングするシステムの開発 (生化学的手法)」を進めた。翻訳中の新生鎖を準備するために、再構成型タンパク質翻訳システムを用いて目的の長さで翻訳停止したリボソーム-新生鎖複合体の作製をおこなった。これを用いてPDIとERp46によるジスルフィド結合導入の観察を行なった結果、PDIはリボソームが立体障害となりリボソームトンネル近くのシステインには直接アクセスできないため、リボソームから離れたところに位置するN末側のシステインペアにジスルフィド結合を導入することがわかった。一方で、ERp46は柔軟な構造を持つためリボソームの立体障害を受けることなく、天然型のジスルフィド結合を好んで導入することがわかった。第2のアプローチとして「高速原子間力顕微鏡を用いたリボソーム-新生鎖複合体に作用するPDIファミリー酵素の一分子観察 (生物物理学的手法)」を行い、統計解析を行った結果、PDIとERp46の新生鎖に対する異なる結合様式が明らかとなった。これらの結果をまとめた論文は、2021年3月9日、米国科学誌iScienceにオンライン掲載された。

Research Progress Status

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Report

(1 results)
  • 2020 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2021 2020

All Journal Article (2 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Distinct roles and actions of protein disulfide isomerase family enzymes in catalysis of nascent-chain disulfide bond formation2021

    • Author(s)
      Hirayama, C., Machida, K., Noi, K., Murakawa, T., Okumura, M., Ogura, T., Imataka, H., and Inaba, K.*
    • Journal Title

      iScience

      Volume: 4 Issue: 4 Pages: 102296-102296

    • DOI

      10.1016/j.isci.2021.102296

    • Related Report
      2020 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] A unique leucine-valine adhesive motif supports structure and function of protein disulfide isomerase P5 via dimerization2021

    • Author(s)
      Okumura M, Kanemura S., Matsusaki M., Kinoshita M., Saio T., Ito D., Hirayama C., Kumeta H., Watabe M., Amagai Y., Lee Y. H., Akiyama S. and Inaba K.
    • Journal Title

      Structure

      Volume: 29 Issue: 12 Pages: 1-14

    • DOI

      10.1016/j.str.2021.03.016

    • Related Report
      2020 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] PDIファミリーによる新生ポリペプチド鎖へのジスルフィド結合導入機構の解明2020

    • Author(s)
      平山千尋、町田幸大、野井健太郎、村川直柔、奥村正樹、小椋光、今高寛晃、稲葉謙次
    • Organizer
      第20回東北大学多元物質科学研究所研究発表会
    • Related Report
      2020 Annual Research Report

URL: 

Published: 2020-07-07   Modified: 2024-03-26  

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