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牛乳プロテオーム解析用プロテオタイピックペプチドライブラリ作成と各種分析への応用

Research Project

Project/Area Number 20K02400
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 08030:Family and consumer sciences, and culture and living-related
Research InstitutionNational Agriculture and Food Research Organization

Principal Investigator

一法師 克成  国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品研究部門, 上級研究員 (30355606)

Project Period (FY) 2020-04-01 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Keywordsターゲット・プロテオミクス / プロテオティピックペプチド / 牛乳 / ヤギ乳 / alpha-S1-casein / beta-lactoglobulin / LC/MS/MS / タンパク質 / ラクトトランスフェリン
Outline of Research at the Start

本研究では、牛乳および乳製品の加工特性、機能性やアレルゲン性などに関与するタンパク質集団(以下、牛乳プロテオームとする)を、ターゲット・プロテオミクスの経験のないLC/MS/MSの利用者も含めて、迅速かつ容易に定量し、解析することを可能にする牛乳プロテオーム解析用プロテオタイピックペプチドライブラリを作成する。さらに、本ライブラリの有用性を示すため、その応用例として、機能性タンパク質であるラクトフェリンの定量法を開発する。本ライブラリは、牛乳プロテオームを対象とする各種研究等に広く利用される研究基盤となる。

Outline of Annual Research Achievements

牛乳の主要なアレルゲンであるcasein類は、加熱による影響を受けにくい。この中で、牛乳タンパク質の約30%を占め、最も多く含まれているalpha-S1-caseinは、多数のIgEエピトープをもちアレルゲン性が高い。また、牛乳タンパク質の約10%を占めるbeta-lactoglobulinも代表的なアレルゲンである。alpha-S1-caseinとbeta-lactoglobulinは、ともに人乳には存在しないタンパク質である。
alpha-S1-caseinを産生できないヤギが、高頻度にSwedish Landraceに存在することが報告されている。そこで、国内で流通しているヤギ乳のalpha-S1-casein量を明らかにすることを主な目的として、牛乳およびヤギ乳のalpha-S1-caseinとbeta-lactoglobulin 由来の共通のプロテオティピックペプチドをSelected Reaction Monitoring(SRM)で検出する、高速液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計(LC/MS/MS)を用いた、牛乳とヤギ乳のalpha-S1-caseinとbeta-lactoglobulinの比較定量法を構築した。
本定量法を用いて、市販の牛乳とヤギ乳(粉乳を含む)のalpha-S1-caseinとbeta-lactoglobulinを比較定量したところ、ヤギ乳(粉乳を含む)のalpha-S1-casein量は、牛乳のalpha-S1-casein量より少なかったが、alpha-S1-caseinが検出されないヤギ乳サンプルはなかった。一方、beta-lactoglobulinについては、alpha-S1-caseinのような、牛乳とヤギ乳間に大きな違いはなかった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本年度の研究実施計画通りに進捗している。

Strategy for Future Research Activity

lactophorin(別名:glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1)は、milk fat globule membrane (MFGM)上に存在するリン酸化糖タンパク質である。牛乳のlactophorinは、抗ロタウィルス活性や抗細菌活性が報告されており、また、牛乳の加工において、安定な乳化特性を示す。これら有用な性質を有するlactophorinについて、牛乳およびヤギ乳の含有量を比較するため、牛乳およびヤギ乳のlactophorinに共通のプロテオティピックペプチドを用いたLC/MS/MSによる定量法を構築する。また、本定量法を用いて、粉乳を含めた市販の牛乳およびヤギ乳のlactophorinを比較定量する。

Report

(4 results)
  • 2023 Research-status Report
  • 2022 Research-status Report
  • 2021 Research-status Report
  • 2020 Research-status Report
  • Research Products

    (2 results)

All 2023 2022

All Presentation (2 results)

  • [Presentation] 牛乳およびヤギ乳のalpha-S1-caseinとbeta-lactoglobulinの比較定量2023

    • Author(s)
      一法師克成
    • Organizer
      日本分析化学会第72年会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] LC/MS/MSを用いた牛乳およびヤギ乳タンパク質の比較定量2022

    • Author(s)
      一法師克成
    • Organizer
      日本分析化学会第71年会
    • Related Report
      2022 Research-status Report

URL: 

Published: 2020-04-28   Modified: 2024-12-25  

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