臨床応用を目指す高効率・高精度なCRISPRノックイン法の確立

Research Project

Project/Area Number	20K06613
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 43060:System genome science-related
Research Institution	Aichi Medical University
Principal Investigator	小西裕之愛知医科大学, 医学部, 教授 (20344335)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	兵頭寿典愛知医科大学, 医学部, 講師 (40710645)
Project Period (FY)	2020-04-01 – 2023-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2020)
Budget Amount *help	¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000) Fiscal Year 2022: ¥520,000 (Direct Cost: ¥400,000、Indirect Cost: ¥120,000) Fiscal Year 2021: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000) Fiscal Year 2020: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Keywords	Cas9 nickase
Outline of Research at the Start	CRISPR/Cas9によるノックインは狙った遺伝子の自在な改変を可能にするが、Cas9標的部位やその他の部位の高頻度なランダム変異（Indels）を伴う。しかし申請者らは、Cas9 nickaseを用いたTandem Paired Nicking法（TPN法）によって従来と概ね同等のノックイン効率を維持しつつランダム変異を著減できることを示した。しかしTPN法のノックインがなぜ、どのように起きるのかは、その制御機構も含めて不明である。そこで本研究では、複数の内在性遺伝子を用いたアッセイ系などによって、同法のノックインがどのような行程で起きるのかを調べ、その分子機序を解析する。得られた知見を利用してノックイン効率の向上を目指し、臨床応用への道を開く。