| Project/Area Number |
20K08553
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
寺崎 泰弘 日本医科大学, 医学部, 准教授 (50332870)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
寺崎 美佳 日本医科大学, 医学部, 講師 (50372785)
遠田 悦子 日本医科大学, 医学部, 教授 (00589327)
康 徳東 昭和大学, 医学部, 講師 (00571952)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
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| Keywords | リンパ球増殖性肺病変 / 薬剤性肺傷害 / 移植肺 / IgG4 関連疾患 / サルコイドーシス / リウマチ肺 / 炎症性腸疾患 / 多中心性キャッスルマン病 / IgG4 陽性間質性肺炎（症候群） / IgG4関連病変 / MCD / 肺の線維化、のう胞化、結晶化 / 局所リンパ球のプロファイリング / IgG4関連病 |
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| Outline of Research at the Start |
著明なリンパ球形質浸潤が特徴の肺病変には細胞内、外の結晶化、幼若な線維化、硝子化線維化、嚢胞化の病変が目立つ症例など、全くベクトルが違う病態がある。リンパ球浸潤の付随所見は多彩で浸潤程度だけでは予後予測もできない。
リンパ球浸潤所見は共通でも線維化タイプやのう胞化などベクトルが大きく違う病変があり肺局所のリンパ球形質細胞の性質自体に大きな違いがある可能性がある。今回IgG4とMCD、リウマチ肺の肺病変などからのリンパ球自身をサンプリングし網羅的解析を行い病態関連因子を抽出しバイオマーカーとして開発応用を目指す。多様なリンパ球浸潤性病変と広く肺の線維化、のう胞化の病態解明につながる研究でもある。
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| Outline of Annual Research Achievements |
多様なリンパ球増殖性肺病変には薬剤性肺傷害病変がある。当院でがん治療のためにエベロリムスを投与された患者は66例のうち19例に薬剤性肺傷害が発症した。薬剤性肺傷害病変はリンパ球浸潤と肉芽腫性病変を伴う肺胞炎で、一部はOP所見がみられた（JNMS.2024）。また、多様なリンパ球増殖性肺病変として炎症性腸疾患に伴う肺病変の解析を行った。１例はメサラジンとアザチオプリンで治療されたクローン病の53歳男性で、肺生検でリンパ球浸潤と肉芽腫が明らかになった。もう１症例は、メサラジン治療を受けた潰瘍性大腸炎の68歳男性で、リンパ球浸潤とOP所見がみられた（RMCR.2023）。多様なリンパ球増殖性肺病変としてサルコイドーシスとRA関連した病変がみられた症例報告をした。両側の肺門リンパ節腫脹と縦隔リンパ節腫脹とともに、両肺に基底ガラス混濁と網状陰影を認めた。気管支肺胞洗浄液にリンパ球増多が認められた。肺生検では、サルコイドーシスに一致する非乾酪性類上皮性肉芽腫が認められた。抗CCP抗体の上昇が認められ、NSIPの病理所見がみられた（TARD）。肺移植による拒絶反応よりリンパ球が多数浸潤、集蔟して線維化を来す肺病変であり、多様なリンパ球増殖性肺病変のモデルにもなる。ラット肺移植モデルでは肺動脈など血管内にCD68、CD3、CD79a陽性の免疫細胞の炎症細胞浸潤、線維化など血管症来たしIgG4関連肺疾患と類似した所見がみられた（Transplant International 2024）。
一方、こられヒトや動物モデルを使い、同一のパラフィン検体にてOpal蛍光多重免疫染色のMantra解析も開始している。リンパ球、マクロファージ、上皮、内皮、線維芽細胞のマーカーなどで同時に標本上のそれらの局在・強度を解析する事で、多様なリンパ球増殖性肺病変の微小環境の解析のツールとして応用を目指している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
IgG4 関連疾患やや多中心性キャッスルマン病の病変のVATS[病理未染スライドでのペプチド解析を行っているが、アーチファクトが多く、ノイズの除去の問題に対応している。また、これらの新しいVATSサンプルの確保が必要となっており時間がかかっている。
一方パラフィン検体を使ってOpal蛍光多重免疫染色のMantraによる解析では、多重染色の抗体の染色順で、発色程度が違うなどエラーがおきている。発現が弱いマーカーは先に染色する、２次抗体をポリマー抗体に変えるなど調整を行うなど良い条件の割り出しに時間がかかっている。
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| Strategy for Future Research Activity |
IgG4関連やMulticentric Castleman's disease関連の肺病変などのVATS病理未染スライドサンプルの確保を進め、届いた症例からレーザーマイクロダイセクションでサンプリングを行いLCMS/MS解析を行う。一方、肺のクライオ生検の検体数が多くなり、この検体としての炎症性肺病変の確保が容易になり、これを用いてLCMS/MS解析も行う事とする。特に炎症性肺病変では浸潤リンパ球はCD4,CD8陽性細胞の比では、通常CD4陽性が多いが、１割程度ではCD8陽性が多い症例がある。この病変について、臨床病理学的解析と併せてペプチド解析してみる。
また、これらのペプチド解析の結果を踏まえて病変関連候補因子は、その抗体を用いてOpal蛍光多重免疫染色のMantraによる解析もKL-6/MAC1抗体など肺胞上皮傷害マーカー、リンパ球、上皮、血管、線維芽細胞などのリネージマーカー、細胞増殖マーカーなどと併せて行う予定である。同一病変標本上で、それらの局在と強度を解析する事で、多様なリンパ球増殖性肺病変の微小環境の解析のツールとして応用を目指す。
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