腎糸球体上皮細胞スリット膜におけるNeurexinの役割の解明
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20K08587
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53040:Nephrology-related
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
福住 好恭 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (20609242)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内許 玉楓 新潟大学, 医歯学系, 助教 (00529472)
安田 英紀 新潟大学, 医歯学系, 助教 (00806490)
河内 裕 新潟大学, 医歯学系, 教授 (60242400)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
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| Keywords | ポドサイト / スリット膜 / neurexin / 蛋白尿 / CD2AP / Podocin / Nephrin / ネフローゼ症候群 / Par6 / synaptotagmin / SV2B / nephrin / Neurexin |
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| Outline of Research at the Start |
Neurexin-1のスリット膜のバリア機能維持における役割を解析する。具体的には、①ノックアウト（KO）マウスを用いたスリット膜の形成、維持におけるNeurexin-1の役割の解析、②Neurexin-1と既知のスリット膜分子との相互作用の解析、③RNA silencing 法によりNeurexin-1発現をノックダウンさせた培養ポドサイトを用いたNeurexin-1のポドサイトの形態維持、突起形成における役割の解析、④次世代シーケンサを用いた発現解析による新規Neurexin-1関連分子の同定、同定された分子群のNeurexin-1との相互作用、機能解析を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
Neurexin1αのスリット膜のバリア構造維持における役割を明らかにするため、Neurexin1αノックアウト（KO）マウスを作製し、スリット膜機能分子の発現を解析した。その結果、KOマウスでスリット膜機能分子nephrin、CD2AP、podocinの発現が著明に低下していることを明らかにした。また、KOマウスは有意な病的蛋白尿を呈することを明らかにした。
Neurexin1αとスリット膜分子との相互作用解析では、Neurexin1αは細胞外部でnephrinの先端部と結合すること、細胞質部の前半部（細胞膜側）でCD2AP、podocinと結合することを明らかにした。さらに、ポドサイトでの発現型であるSS4（+）Neurexin1αバリアントのみがnephrin、CD2AP、podocinとの結合性を持ち、持ち、SS4（-）バリアントはこれらスリット膜分子との結合性を持たないことを明らかにした。
siRNA処理でNeurexin1α の発現を抑制した培養ポドサイトで、CD2APの発現低下、局在パターンの異常が見られた。また、細胞の円形化、及び突起の消失が観察された。これらの結果から、 Neurexin1αはポドサイトの細胞形態、突起の維持に重要な役割を果たしていることを明らかにした。
ポドサイトにおけるNeurexin1αの関連分子を明らかにするため、Neurexin1α KOマウス腎皮質材料を用いたリアルタイムPCRの検討を行った。その結果、KOマウスでNeurexin1αの結合分子であるneuroligin、SNARE複合体分子SNAP-25、Syntaxin、SNARE複合体関連分子Mintの発現は変化しないが、シナプス小胞分子SV2Bとsynaptotagminの発現は低下することを発見し、これら分子がNeurexin1α関連分子であることを明らかにした。
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Report
(4 results)
Research Products
(29 results)
