| Project/Area Number |
20K10083
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57050:Prosthodontics-related
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| Research Institution | Osaka Dental University |
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Principal Investigator |
川本 章代 大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (50368156)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2020: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
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| Keywords | エクソソーム / 歯肉溝滲出液 / miRNA |
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| Outline of Research at the Start |
糖尿病関連歯周病患者の歯肉溝滲出液を採取し、エクソソーム内包miRNAを抽出し発現パターンを解析することで、歯周病と糖尿病とを併発する患者特有の発現挙動を把握し治療に結びつけることを目的とした。具体的には糖尿病患者ならびに健常者から歯肉溝滲出液を採取し、エクソソームの存在確認後、miRNA発現解析を行う。得られたデータと患者臨床情報を比較し、糖尿病関連歯周病特有のmiRNA発現パターンを探索する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
慢性歯周炎患者、ならびに慢性歯周炎と糖尿病を併発する患者の、上顎前歯を防湿後、歯肉溝にペリオペーパーを挿入し、染み出た浸出液を歯肉溝滲出液として採取した。血液の混入したペリオペーパーは取り除いた。慢性歯周炎は、歯周ポケット深さ、プロービング時の出血、歯の動揺度の測定から診断した。回収したペリオペーパーは、解析まで－８０度にて保存した。
解析には、ペリオペーパーを取り除き遠心後、Total Exosome Isolationを全液量の半分量入れ、SUPERaseInRNase Inhibitorを追加し、vortex後、１時間４度で静置、その後、遠心しエクソソームの抽出した。
エクソソームの存在を確認するために、ELISA、粒子径測定ならびにエクソソーム観察を実施した。すなわち、エクソソーム表面に存在しているCD9/CD63を検出するためサンドイッチELISA法を、ELSZ-2000を用いて粒子径100nm範囲のピークを観察した。また、transmission electron microscopeにてエクソソームを観察した。
RNAを 3D-Gene RNA extraction reagentを用いて抽出した。3D-Gene キットを用いて、網羅的にmiRNAの発現を解析した。
網羅的解析より、解析した全miRNA 2632個のうち、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者で発現が上昇したのは25個のmiRNA、減少したのは23個のmiRNAであった。今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、糖尿病患者の血清miRNA関連論文を参考に、これらのmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
新型コロナウイルス蔓延時期と重なり、対象となる被験者の診察控え、ならびに試料採取とコロナ検査が混同する可能性から、試料採取が遅延したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、再度サンプルを採取し、網羅的解析によって得られたmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
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