| Project/Area Number |
20K10093
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
岸本 晃治 岡山大学, 歯学部, 客員研究員 (40243480)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥井 達雄 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 准教授 (40610928)
伊原木 聰一郎 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (80549866)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | angiogenin / plexin-B2 / 口腔癌 |
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| Outline of Research at the Start |
Angiogenin（ANG）は、リボヌクレアーゼ活性を有する唯一の血管新生蛋白で、内皮細胞のみならず癌細胞や神経細胞で細胞増殖、生存、再生能力等の様々な生物活性を有する。2017年にANGレセプターがplexin-B2（PLXNB2）であることが報告されて以来、PLXNB2を介したANGの生物活性機序の解明が課題である。ANGは特に口腔癌組織の低酸素環境下で強発現するため、口腔癌治療の分子標的として有望と考えられる。本研究では、口腔癌におけるPLXNB2の発現とANGをリガンドとするPLXNB2の機能解析を行うことにより、ANG-PLXNB2経路を標的とした新規口腔癌治療の可能性を探求する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
(目的)Angiogenin(ANG)は、リボヌクレアーゼ活性を有する唯一の血管新生蛋白として発見されたが、内皮細胞のみならず癌細胞や神経細胞で細胞増殖、生存、 再生能力などの様々な生物活性を有する。2017年に、ANGレセプターがplexin-B2(PLXNB2)であることが報告されて以来、癌や神経変性疾患におけるPLXNB2を介したANGの生物活性機序が注目されている。本研究では、口腔癌におけるPLXNB2の発現とANGをリガンドとするPLXNB2の機能解析を行うことにより、ANG-PLXNB2経路を標的とした新規口腔癌治療の可能性を明らかにする。
(実施計画)1. PLXNB2の発現が強い培養口腔癌細胞HSC-3を選択し、以下の実験を行う。2. PLXNB2 shRNAプラスミド DNA (Sigma 社)を使用し、LipofectamineTM 3000 Transfection Reagentを用いて遺伝子導入する。6well dishに70%コンフルエントの細胞を用意する。Mediumは6h前からDMEM，FBS(-)とする。PLXN:SIGMA MISSION shRNA Plasmid DNA。Control:SIGMA MISSION pLKO.1-puro Non-Mammalian shRNA Control Plasmid DNA。2日培養後、puromycinにてセレクションを行う。3. Stable shRNA transfectantを作製し、wild populationとして培養後、クローニングする。
(成果) 再度、培養口腔癌細胞HSC-3に対して、PLXNB2 shRNAプラスミド DNA を遺伝子導入した。そして、stable shRNA transfectantを作製した。細胞を回収後、ウエスタンブロット法でPLXNB2の発現を調べたが、やはり有意な低下は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
培養口腔癌細胞HSC-3に対して、再度、PLXNB2 shRNAプラスミド DNA を遺伝子導入し、PLXNB2のノックダウンを試みたが、タンパクレベルでのPLXNB2の有意な発現低下が認められず、その後の実験に進めなかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
PLXNB2 stable shRNA transfectantの細胞を作製することが急務である。このため、PLXNB2 shRNAプラスミド DNAの設計を変更する。また、遺伝子導入のエレクトロポレーションの条件変更も行う。
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