The study for understanding the molecular mechanism of miR156/529-SPL module conserved among land plants

• Project/Area Number: 20K15814
• Research Category: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: Basic Section 44030:Plant molecular biology and physiology-related
• Research Institution: Kochi University (2022); The University of Tokyo (2020-2021)
• Principal Investigator: Tsuzuki Masayuki 高知大学, 教育研究部総合科学系生命環境医学部門, 講師 (40845616)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2022)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2022: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000); Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2020: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
• Keywords: マイクロRNA / 転写因子 / ゼニゴケ / シロイヌナズナ / 遺伝子発現制御 / 成長期移行 / SPL / 花成制御 / microRNA / 転写制御

Outline of Research at the Start

陸上植物に保存されたmicroRNA156/529とSPL転写因子による成長期移行モジュールに着目し、どのような分子メカニズムによって成長期移行を促進しているのかを明らかにする。種子植物シロイヌナズナとコケ植物ゼニゴケのmiR156/529および標的遺伝子のSPLに着目し、microRNAの発現が変動するメカニズム、およびSPL転写因子の成長期移行制御メカニズムの共通部分を明らかにする。

Outline of Final Research Achievements

In this study, we focused the miR156/529-SPL transcription factor regulatory module, which controls the transition of growth phase in land plants, and aimed to understand the molecular mechanism. We performed in vitro protein synthesis and deep sequencing to identify the DNAs binding to the MpSPL2 in Marchantia polymorpha. Although the DNA sequences were identified, not clear cis regulatory motif was not obtained. On the other hand, Arabidopsis AtSPL3 and AtSPL9 were also tested and the DNA binding to those SPL homologs were successfully identified. The cis-regulatory motif was also detected by informatics analysis. We also tried to detect DNA by in vivo ChIP-seq of MpSPL2 with transformants overexpressing MpSPL2 but could not succeed in the detection. For identification of evolutionarily conserved mechanism, further studies are needed.

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

本研究は、植物にとって共通する発生メカニズムである成長期の移行の制御に関して解明しようとするものであり、将来的な作物エンジニアリングなどの場面において、重要な分子メカニズムの一端の解明を目指したものである。結果としてはin vitroでのゼニゴケSPL2タンパク質に結合したDNAの検出を試み、タンパク質の合成および結合DNAの次世代シーケンシングによる検出を行うことができたが、下流遺伝子群の同定までは至らず、引き続き実験の条件検討が必要である。一方シロイヌナズナのホモログタンパク質を用いて下流遺伝子群を同定できたため、将来的な成長期移行メカニズム解明のための解析の基盤の整備は進んだと考える。

Research Products

• [Int'l Joint Research] ミシガン大学(米国)
• [Journal Article] The Renaissance and Enlightenment of Marchantia as a model system (2022)
  • Author(s): Bowman, J.L., Berger,F., Briginshaw, L.N., Davies, K.M., Dierschke, T., Dolan,L., Fisher, T.J., Flores-Sandoval,E., Futagami,K., Ishizaki, K., Kato, H., Kohchi, T., Levins, J., Lin, S-S., Nishihama, R., Romani, R., Tanizawa, Y., Tsuzuki, M., Watanabe,Y., Yamato, K.T., Zachgo, S.
  • Journal Title: The Plant Cell Volume: 34 Issue: 10 Pages: 3512-3542
  • DOI: 10.1093/plcell/koac219
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Reinforcement of transcriptional silencing by a positive feedback between DNA methylation and non-coding transcription (2021)
  • Author(s): Rothi, M. Hafiz Tsuzuki, Masayuki Sethuraman, Shriya Wierzbicki, Andrzej T.
  • Journal Title: Nucleic Acids Research Volume: 49 Issue: 17 Pages: 9799-9808
  • DOI: 10.1093/nar/gkab746
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Presentation] microRNA319 標的遺伝子の進化的解析 (2022)
  • Author(s): 二神和敬，都筑正行，渡邊雄一郎
  • Organizer: 第63回日本植物生理学会年会
• [Presentation] シロイヌナズナの miRNA 生産におけるDICER-LIKE 1 C末端領域の重要性の再検証 (2022)
  • Author(s): 橋本梨乃，都筑正行，東山哲也，渡邊雄一郎
  • Organizer: 第63回日本植物生理学会年会
• [Presentation] 植物における非コード転写の機能とメカニズム (2022)
  • Author(s): 都筑正行
  • Organizer: 第63回日本植物生理学会年会
  • Invited
• [Presentation] Pervasive non-coding transcription by Pol V suggesting a genome surveillance mechanism. (2021)
  • Author(s): Masayuki TSUZUKI
  • Organizer: 第44回分子生物学会大会
  • Invited
• [Presentation] 苔類ゼニゴケにおけるPol IV、Pol Vの機能解析 (2021)
  • Author(s): 池田ひかり，渡邊雄一郎，都筑正行
  • Organizer: 日本植物学会第85回大会
• [Presentation] Pervasive non-coding transcription by Pol V suggesting a genome surveillance mechanism. (2021)
  • Author(s): Masayuki Tsuzuki
  • Organizer: 2nd webinar of the IRN France-Japan Frontiers in Plant Biology : Genome dynamics and epigenetics
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] ゼニゴケにおけるRNA ポリメラーゼIV、Vの機能解析 (2021)
  • Author(s): 池田ひかり, 都筑正行, 渡邊雄一郎
  • Organizer: 第62回日本植物生理学会年会
• [Book] 実験医学2020年6月号 News & Hot Paper Digest 離れた調節因子は植物に広く保存されている (2020)
  • Author(s): 都筑正行
  • Total Pages: 147
  • Publisher: 羊土社
  • ISBN: 9784758125321
• [Remarks] Researchmap
  • URL: https://researchmap.jp/m_tsuzuki
• [Remarks] 渡邊雄一郎研究室ホームページ個人ページ
  • URL: http://park.itc.u-tokyo.ac.jp/RNAwatanabe/profile_3.html